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技術文章

滬鼎生物|維甲酸(Tretinoin)ELISA試劑盒使用說明

閱讀:1176          發布時間:2022-5-11

本試劑盒僅供研究使用。


使用目的:本試劑盒用于測定樣本中維甲酸(Tretinoin)的含量。


實驗原理本試劑盒應用酶聯免疫競爭法測定標本中維甲酸(Tretinoin)水平。用純化的維甲酸(Tretinoin)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入維甲酸(Tretinoin),和HRP標記的維甲酸(Tretinoin)抗原,使它們競爭結合,經過*洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的維甲酸(Tretinoin)的含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中維甲酸(Tretinoin)的含量。  


標本要求

1.標本處理:

(1)水樣   采集后經 -20℃反復凍融三次,再經玻璃纖維過濾后,備查

(2)組織   樣品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相關文獻提取進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,備查

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟加樣:分別設標準孔、空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加50微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。  

配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。

4.如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

檢測范圍:2pg/ml -90 pg/ml


保存條件及有效期

1.試劑盒保存:2-8℃。

2.有效期:6個月


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