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上海滬鼎生物科技有限公司>技術文章>關于PAN胎牛血清使用中遇到的常見問題總結

技術文章

關于PAN胎牛血清使用中遇到的常見問題總結

閱讀:874          發布時間:2021-2-19

1、問:加到培養基中的血清必須滅活嗎?
 
答:不是必須的,看做什么實驗了。
 
2、問:PAN胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎?
 
答:如果用于培養大多數的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養一些表面具有補體受體的細胞,如內皮細胞,血清是 需要滅活,一般是56℃,30min。
 
3、問:我要做滋養細胞培養,胎牛血清要滅活嗎?
答:進口的一般都已滅活,國產的不一定,還是滅活一下再用較安全。
 
4、問:我用病毒上清轉染細胞,培養用的血清需要滅活嗎?因為血清中可能有些補體和抗體,是不是會影 響轉染?我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結合,影響 轉染,正確嗎?細胞是單核細胞白血病細胞, 病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養基加病毒孵育幾小時,目的是什么?
 
答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結合過程的干擾,一般是2-6小時,根據細胞的狀態決定。血清不一定需 要滅活,滅活的目的是將血清中的補體滅活 !這要根據實際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個小時。


5、問:因為實驗室水浴鍋失控,血清滅活時,溫度到了61.7℃,這血清還能用嗎?
 
答:多長時間啊?短時間應該可以吧,我有一次加熱了一個多小時,還照樣用。
 
6、問:我滅活胎牛血清時,用的電磁爐,定在了70℃,本來說調溫度到56℃再放血清的,后來忘了,就把 血清放進去了,所以滅活的溫度肯定超過56℃了,不知道這樣對血清 有沒有影響?
 
答:常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等,其中常用的手法是56℃ 熱處理30分鐘。看看你養的細胞是什么,一般的話估計問題不大,要是 很珍貴的細胞還是慎重一點啊。熱滅活目的是 為了去除血清中補體等對熱敏感的物質, 在對補體滅活以外,熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作 用。現在好像不主張熱 滅活,熱滅活經常給血清產品帶來負面影響,對血清的加熱經常導致血清中沉淀的產生,此外 ,有研究結果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用。

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