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上海滬鼎為您總結(jié)ELISA各個(gè)方法優(yōu)缺點(diǎn)

閱讀:2048          發(fā)布時(shí)間:2021-1-26

ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再加入一級(jí)檢測(cè)抗體(primarydetection Ab),形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標(biāo)記了,即可用來(lái)直接測(cè)定抗原的量,若無(wú),則可利用另一個(gè)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量。

1.直接法(direct ELISA)
優(yōu)勢(shì):操作手續(xù)簡(jiǎn)短,因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)。
缺點(diǎn):試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記,但不是每種抗體都適合做標(biāo)記,費(fèi)用相對(duì)提高。

2.間接法(indirect ELISA)
優(yōu)勢(shì):二抗可以加強(qiáng)信號(hào),而且有多種選擇能做不同的測(cè)定分析。不加酶標(biāo)記的一級(jí)抗體則能保留它多的免疫反應(yīng)性。
缺點(diǎn):交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。

3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)
優(yōu)勢(shì):高靈敏、高專一性,抗原無(wú)須事先純化。
缺點(diǎn):抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。

4.競(jìng)爭(zhēng)法(competitive ELISA)
優(yōu)勢(shì):可適用比較不純的樣本,而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺點(diǎn):整體的敏感性和專一性都較差。

5.新ELISA技術(shù):
基于細(xì)胞法(cell-based ELISA):
優(yōu)勢(shì):無(wú)需裂解細(xì)胞,所以目標(biāo)蛋白損失少,可測(cè)定完整細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。
缺點(diǎn):不能測(cè)定抗原量。

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