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技術文章

細胞核的分離提取操作步驟

閱讀:2677          發布時間:2020-9-28

一、操作步驟

1.用頸椎脫位的方法處死小白鼠后,迅速剖開腹部取出肝臟,剪成小塊(去除結締組織)盡快置于盛有0.9%NaCl的燒杯中,反復洗滌,盡量除去血污,用濾紙吸去表面的液體。

2.將濕重約1g的肝組織放在小平皿中,用量筒量取8ml預冷的0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液,先加少量該溶液于平皿中,盡量剪碎肝組織后,再全部加入。

3.剪碎的肝組織倒入勻漿管中,使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中,左手持之,右手將勻漿搗桿垂直插入管中,上下轉動研磨3~5次,用3層紗布過濾勻漿液于離心管中,然后制備一張涂片①,做好標記,自然干燥。

4.將裝有濾液的離心管配平后,放入普通離心機,以2500rpm,離心15分鐘;(1)緩緩取上清液,移入高速離心管中,保存于有冰塊的燒杯中,待分離線粒體用;(2)同時涂一張上清液片②做好標記,自然干燥;(3)余下的沉淀物進行下一步驟。

5.用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液懸浮沉淀物,以2500rpm離心15分鐘棄上清,將殘留液體用吸管吹打成懸液,滴一滴于干凈的載玻片上,涂片③,自然干燥。

6.將①、②、③涂片用l%甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。

 

二、結果

分別于高倍鏡下觀察三張涂片,描述鏡下所見。

 

三、高速離心分離提取線粒體

1.操作步驟

① 將裝有上清液的高速離心管,從裝有冰塊的燒杯中取出,配平后,以17000rpm離心20分鐘,棄上清,留取沉淀物。

② 加入0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣液lml,用吸管吹打成懸液,以17000rpm離心20分鐘,將上清吸入另一試管中,留取沉淀物,加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液混勻成懸液(可用牙簽)。

③ 取上清液和沉淀物懸液,分別滴一滴于干凈載玻片上(分別標記④、⑤涂片),各滴一滴0.02%詹納斯綠B染液蓋上蓋片染20分鐘。

2.結果

油鏡下觀察,顆粒狀的線粒體被詹納斯綠B染成藍綠色。

 

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