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技術文章

急,血清出現沉淀怎么辦?

閱讀:1561          發布時間:2020-9-10

很多小伙伴買到血清的時候會出現沉淀現象,什么是沉淀呢?沉淀會影響使用嗎?沉淀和血清質量有關嗎?該如何處理沉淀呢?接下來和小編一探究竟吧!

1.什么是血清沉淀?
血清中經常會出現肉眼可見的沉淀,其成分有多種類型,產生的原因有很多,主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。

① 纖維蛋白(Fibrin)
血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產過程中,血清采集、過濾(3 次 0.1 μm過濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處于溶解狀態。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集,形成肉眼可見的沉淀。
下圖是血清因反復凍融而造成纖維蛋白原的凝集

② 磷酸鈣(Calcium Phosphate)
這是一種常見的沉淀成分,通常會造成血清出現云霧狀渾濁。當產品在 37℃保存時,這種現象尤其明顯,在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點的存在。這些小黑點在布朗運動的作用下四處游動,常被誤認為是微生物污染。
③ 其他成分(Other)
血清中的其他成分也會形成沉淀,例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等

2.血清沉淀會影響細胞培養嗎?

① 細胞生長
我們在出廠前都會對血清進行一系列質檢測試,確保血清質量達到嚴格標準。血清測試和細胞培養經驗也表明,其沉淀成分不會影響血清作為細胞培養添加物的表現。這一點得到了眾多客戶和其他血清供應商的肯定。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集,形成肉眼可見的沉淀。

② 懷疑污染
磷酸鈣顆粒經常會被當成微生物污染而引發不必要的擔憂。一般情況下,當操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時,常將其存放在 4℃冰箱中觀察,并考慮接下來是否繼續使用。但這樣會使沉淀進一步增多,反而會使血清更加渾濁,進而誤以為存在血清污染。并且,在倒置顯微鏡下,可在血清中觀察到四處游動的小黑點(磷酸鈣顆粒的布朗運動),更容易使人誤以為存在微生物污染。
為防止這類誤解的產生,我們不建議客戶培養血清來驗證是否存在污染,而是將血清直接接種在細菌培養基上進行培養,以觀察是否有細菌的增殖。并且,進行革蘭氏染色,并在油鏡(100 X 10 倍)下觀察可直接確認是否存在微生物污染。

3.怎樣操作可以盡量避免沉淀出現?

① 解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃,實驗顯示非常容易產生沉淀物。

② 解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生

③ 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。

④ 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

⑤ 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。 血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。

4.出現血清沉淀該如何處理?
我們建議您采用2000 rpm 離心5分鐘,取上清使用就好,比過濾方便,不需要另外準備濾心和針筒,又不容易污染。

5.總 結:
血清產品中出現沉淀屬于常見現象,但不會影響血清的品質,對細胞培養而言也是沒有任何問題的,大家可以放心使用!

 

 

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