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技術(shù)文章

如何調(diào)整人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的對(duì)策

閱讀:713          發(fā)布時(shí)間:2019-11-18

    ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在科研上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,人ELISA試劑盒如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。 

    一.下面將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題解決辦法總結(jié)于下:

    1.選擇試劑: 選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

    2.標(biāo)本收集與保存: 避免使用肉眼可見(jiàn)的溶血標(biāo)本、高脂標(biāo)本和混濁標(biāo)本;2-8℃下,標(biāo)本可放置24-48小時(shí),長(zhǎng)期保存需放置-20℃下。請(qǐng)避免反復(fù)凍融。


 
    二.人ELISA試劑盒具體請(qǐng)參照: 

    1.試劑使用中的準(zhǔn)備工作及注意事項(xiàng)
 
    2.試劑盒中會(huì)有提示,一般需要準(zhǔn)備的有: 洗滌液;用前配制;有的試劑盒會(huì)標(biāo)明,配好的4度下一般可以放一個(gè)月;如果沒(méi)有標(biāo)明,盡量用新鮮的,不要多配制。顯色液(有A液和B液的),用前15分鐘配制
 
   3. 標(biāo)準(zhǔn)品:有的試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品是已經(jīng)配制好的,4度保存;有的是要現(xiàn)配制的;按照說(shuō)明書(shū)操作,濃縮生物素結(jié)合的二抗和HRP:如果需要配制,試劑盒沒(méi)注明配好可以保存多久的話,盡量現(xiàn)配現(xiàn)用(用前15分鐘配制) 

    4.原則是:試劑盒上沒(méi)有指出配制物的儲(chǔ)藏方式的話,應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用;不要怕麻煩;還有小瓶的管子開(kāi)蓋前要離心,以免蓋子上粘連以后總量不夠

   5.加 樣:室溫溫育的試劑,特別是溫育時(shí)間比較短的實(shí)驗(yàn)操作的試劑,加樣對(duì)數(shù)據(jù)的影響比較大,特別要注意加樣問(wèn)題 

 

    三.不好的操作原因:


    1.不會(huì)正確使用加樣器

    2.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣

    3.人ELISA試劑盒手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣後放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))

    4.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外

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