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直擊,小鼠飼養(yǎng)細(xì)胞制備
閱讀：2348 發(fā)布時(shí)間：2019-3-6 生物科研這件事真的是微妙微翹，有太多種變化，太多種可能發(fā)生。比如說在細(xì)胞融合后選擇性培養(yǎng)的過程中，就會(huì)有大量骨髓瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞相繼死亡，此時(shí)單個(gè)或少數(shù)分散的雜交瘤細(xì)胞多半不易存活，通常必須加入其它活細(xì)胞使之繁殖。而這種被加入的活細(xì)胞稱之為飼養(yǎng)細(xì)胞（Feeder Cells）。飼養(yǎng)細(xì)胞促進(jìn)其他細(xì)胞增殖的機(jī)制尚不明了，一般認(rèn)為它們可能釋放非種屬特異性的生長ci激因子，為雜交瘤細(xì)胞提供必要的生長條件；也可能是為了滿足新生的雜交瘤對(duì)細(xì)胞密度的依賴性。在常用的飼養(yǎng)細(xì)胞中有胸腺細(xì)胞、正常脾細(xì)胞和腹水巨噬細(xì)胞。其中小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞來源及制備較為方便，且有吞噬清除死亡細(xì)胞的作用，因此使用為方便。
下面就讓上海滬鼎生物科技有限公司帶您去看看制備方法：
1、小鼠（一般選取經(jīng)產(chǎn)母鼠）脫頸椎致死，注意斷頸椎時(shí)盡量減少對(duì)腹腔的壓迫，避免損傷腹腔內(nèi)血管，以防飼養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)含有大量血細(xì)胞。
2、將小鼠浸泡于75%酒精中5min，然后手提住小鼠尾巴，上下于酒精中涮洗數(shù)次。置于超凈臺(tái)無菌平皿中。
3、用無菌剪鑷從后腹剪開皮膚，沿兩側(cè)剪開皮膚，暴露腹部，注意不要損傷腹膜。用酒精棉球擦拭腹膜。
4、用注射器吸取6-8ml的不*培養(yǎng)基注射入腹腔，注意注射時(shí)用鑷子提起腹膜，避免針頭刺到腸管等腹腔臟器。
5、用棉球輕輕an摩腹部1min，吸出注入的培養(yǎng)液。
6、800-1000 r/min離心5-10 min，棄去上清。若腹腔血管損傷，沉淀中可見有紅細(xì)胞。
7、用5ml HAT培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果，補(bǔ)加HAT培養(yǎng)基，使細(xì)胞濃度達(dá)2×105/ml。（一般情況下一只經(jīng)產(chǎn)母鼠可鋪2-3塊96孔板。）
通常對(duì)巨噬細(xì)胞來說，96孔板每孔需要2×104個(gè)細(xì)胞，24孔板需105個(gè)細(xì)胞。每只小鼠可采~5×106個(gè)細(xì)胞，因此一只小鼠可供兩塊96孔板飼養(yǎng)細(xì)胞。
8、將上述細(xì)胞懸液加入96孔板，每孔0.1ml，37℃，6% CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
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