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技術(shù)文章

針對植物組織樣本處理有哪些方法?

閱讀:2399          發(fā)布時(shí)間:2017-9-20

    一些常見的樣本的處理是科研實(shí)驗(yàn)中zui基本的,相信很多科研工作者都是了解和清楚的,但是植物組織樣本該怎樣處理,相信很多科研朋友就是一頭霧水,但是沒有關(guān)系,上海滬鼎帶您從專業(yè)的角度來了解植物組織樣本的處理方法.
一、勻漿介質(zhì)
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。
二、組織勻漿的制備
1、取組織塊(0.2g~0.5g)zui少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱重,放入5ml的勻漿管中。
2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例加入4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。
3、勻漿的方式:手工勻漿,機(jī)器勻漿。
① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充分研碎,制成20%的勻漿液。
② 機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī)10000~15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成20%組織勻漿,也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(勻漿時(shí)間10秒/次,間隙30秒,連續(xù)3~5次,在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延長勻漿時(shí)間),
鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片、染色均可以),顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時(shí)間。
4、將制備好的20%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進(jìn)行測定.
三、樣本保存:
   植物組織樣本暫時(shí)不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。

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