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Pfu DNA Polymerase

規(guī)格：500U

濃度：5U/ul

保存：-20℃保存, 有效期至少一年。

產品簡介：

Pfu DNA Ploymerase 是從克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大腸桿菌中表達并經過柱純化

分離出來的重組蛋白，其分子量為90kD。由于Pfu 酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能糾正DNA 擴增過程中

產生的錯配，而傳統(tǒng)的Taq 酶卻不能，其它耐熱DNA Polymerase 如Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等雖具有校

正功能，但Pfu 酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐熱DNA Polymerase 中出錯率zui低的。Pfu 酶無5’→3’核酸外切酶活性，

PCR 反應中的延伸速度一般為0.5-1kb/min，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶熱穩(wěn)定性更好，95℃ 1小時仍保持

90%以上的活性，對于GC 含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。Pfu 酶的PCR 產物為

平末端，可加A 處理再與T-載體連接或使用平末端克隆載體。

活性定義：

1 單位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定義為在74℃，30 分鐘內，以活性化的大馬哈魚精子DNA 作為模板/

引物，將10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質所需的酶量。

質量控制：

SDS-PAGE 檢測Pfu DNA Polymerase 純度大于99%；經檢測無外源核酸酶活性；PCR 方法檢測無宿主殘余

DNA；能有效地擴增人類基因組中的單拷貝基因；室溫存放一周，無明顯活性改變。

酶貯存緩沖液：

50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol；其他成份。

適?9?2范圍：

用于DNA 的高保真擴增，如基因表達克隆、基因定點突變、細胞內基因點突變的分析（SNP）和末端補平

等。

建議PCR 體系（以50μl 反應體系為例）

Template <0.5μg

上游引物（10μM） 1μl

下游引物（10μM） 1μl

10×Buffer（含Mg2+） 5μl

dNTP（各2.5mM） 4μl

Pfu DNA Polymerase 0.5-1μl

ddH2O up to 50μl

注意事項：

1、PCR 反應體系加樣時，zui后一步加入Pfu DNA Ploymerase，整個過程宜在冰上操作。

Solarbio

Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd

/82

Http://www.solarbio.cn

2、取Pfu DNA Ploymerase 做PCR 反應時，請用高壓滅菌處理過的吸頭。

3、10×Pfu Buffer 中含20 mM Mg2+，如PCR 反應需要較高Mg2+濃度，請另行加入。

4、 用Pfu 酶擴增時，引物的純度要求較高，引物長度大于18 個堿基，Tm值在55-80℃之間，引物濃度在0.1-0.5uM

之間，比Taq 酶略高。

相關產品：

2×Pfu PCR MasterMix (含染料）

dNTPs Mix(10mM each)

10×DNA 上樣緩沖液

50×TAE 緩沖液

GoldView II 型核酸染色劑(5000×)

上海橋星生物

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