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上海橋星貿易有限公司

無內毒素快速質粒中量提取試劑盒

時間:2013-2-27閱讀:1446
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英文名稱:EndoFree plasmid ezFlow midi kit

中文名稱 :無內毒素快速質粒中量提取試劑盒

編號:PD1420-01

規格: 10次

品牌:biomiga

說明 :

產品組成

Catalog #

PD1420-00

PD1420-01

PD1420-02

Preps

2

10

25

EzBindTM Columns

2

10

25

Buffer A1

6 mL

30 mL

70 mL

Buffer B1

6 mL

30 mL

70 mL

Buffer N3

3 mL

15 mL

30 mL

Buffer KB

12 mL

60 mL

135 mL

Buffer RET

12 mL

60 mL

135 mL

Endofree Elution Buffer

3 mL

15 mL

40 mL

RNase A (20 mg/mL)

0.6 mg

(30 µL

3 mg

(150 µL

7 mg

(350 µL

User Manual

1

1

1

 
保存條件:

RNAse A4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 4℃保存,其它組分室溫保存。

注意事項:

1. 質粒拷貝數: 純化中低拷貝的質粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的DNA Wash BufferEndofree Elution Buffer.

2. 轉化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養后,再重新挑選新的單個菌落進行培養。

3. 切勿直接取凍存的菌進行培養。

操作簡明步驟:

1. 50 µL新鮮的菌液接種到15-50 mL (勿超過 50 mL)的LB培養基(含適量抗生素),37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。

2. 加入2.5 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。

3. 加入2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。

4. 加入1 mL Buffer N3, 立即反轉5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現白色絮狀沉淀。

5. 將裂解液轉移至高速離心管,室溫下在12,000 x g 離心10分鐘。

6. 轉移上清液5 mL向裂解液中加入1倍體積的Buffer RET (即每5 mL裂解液加入5 mL Buffer RET),及3 mL的100% ethonal,用手用力甩5次以混勻,需馬上離心過DNA柱。

7. 立即轉移6 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中,室溫下5,000 x g離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。

8. 可選:向離心柱中加入5 mL Buffer KB,室溫下5,000 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。

9. 向離心柱中加入5 mL 70% 乙醇,室溫下5,000 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”

10. 將離心柱放回高速離心機中,室溫下5,000 x g開蓋離心10分鐘,以*去除殘留的乙醇。

11. 將離心柱轉至一個新的15 mL離心管中,向DNA柱膜的正中加入1 mL Endofree Elution Buffer, 室溫放置1分鐘,5,000 x g 離心5分鐘,以洗脫質粒DNA。

12. 15 mL離心管中的洗脫液上柱再放置洗脫1分鐘,5,000 x g 離心5分鐘。 兩次洗脫將提高得率。

操作流程:

 

上海橋星

客服 &


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