藥敏實(shí)驗(yàn)方法藥敏紙片實(shí)驗(yàn)方法

時(shí)間：2013-2-20閱讀：9046

藥敏實(shí)驗(yàn)方法

藥敏實(shí)驗(yàn)方法
1.實(shí)驗(yàn)材料：

1.1培養(yǎng)基：如做大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)可選擇普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂或麥康凱培養(yǎng)基，做沙門氏菌可選擇SS培養(yǎng)基，巴氏桿菌可選擇血液瓊脂。

1.2藥敏試紙：購(gòu)買、自制或廠家提供

1.3細(xì)菌：從病雞病變部位提取，如肝臟、心臟、脾臟等臟器。

1.4接種環(huán)、酒精燈、打孔器、牛津杯

1.5移液器、滴頭

2.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：

2.1藥敏片的準(zhǔn)備：自制

2.1.1藥敏片的制備：取定性濾紙，用打孔機(jī)打成6毫米直徑的圓形小紙片，取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎，經(jīng)15磅15-20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數(shù)天，使*干燥。

2.2.2抗菌藥紙片制作：在上述含有50片紙片的青霉素瓶?jī)?nèi)加入藥液適量，并翻動(dòng)紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動(dòng)紙片時(shí)不能將紙片搗爛。同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過(guò)夜，干燥后即密封，切勿受潮，置陰暗干燥處存放，有效期3-6個(gè)月。

2.2藥液的制備（用于商品藥的試驗(yàn)）：按商品藥治療量3-5倍比例配制藥液；如治療量為1L水加1g藥，配制藥液時(shí)就是1g加200-300ml水或1L水加3-5g藥，及配制藥敏片所用的藥液。

3.實(shí)驗(yàn)操作方法：

3.1藥敏片法

3.1.1在“超凈臺(tái)”（或自制無(wú)菌操作臺(tái)）中，用（酒精燈）經(jīng)火焰滅菌的接種環(huán)從病料中挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式：用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開始劃線涂菌至平皿的1/2，然后找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細(xì)菌均勻密布于平皿。（另：可將待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液，將少量混懸液倒入平皿培養(yǎng)基上，輕晃平皿使鋪勻，放置5-10min）。

3.1.2將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準(zhǔn)確的觀察結(jié)果，要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上，一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼4-5片），每種藥敏片的名稱要記住。

3.1.3將平皿培養(yǎng)基倒置放于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察效果。

4.結(jié)果觀察：

在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四周擴(kuò)散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內(nèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制。過(guò)夜培養(yǎng)后形成一個(gè)抑菌圈，抑菌圈越大，說(shuō)明該菌對(duì)此藥敏感性越大，反之越小，若無(wú)抑菌圈，則說(shuō)明該菌對(duì)此藥具有耐藥性。其直徑大小與藥物濃度、劃線細(xì)菌濃度有直接關(guān)系。

5.判定標(biāo)準(zhǔn)：

5.1藥敏實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，應(yīng)按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標(biāo)準(zhǔn)。

表1 藥物敏感實(shí)驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)

抑菌圈直徑（毫米）	敏感度
20以上	極敏
15-20	高敏
10-14	中敏
10以下	低敏
0	不敏

5.2 藥物敏感實(shí)驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)參考表1，抑菌圈直徑在15毫米以上為高敏，10毫米以下為低敏，無(wú)抑菌圈為不敏。

6.影響藥敏結(jié)果的因素：

6.1培養(yǎng)基：應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)菌的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行配制。傾注平板時(shí)，厚度合適（約5-6mm），不可太薄，一般90mm直徑的培養(yǎng)皿，傾注培養(yǎng)基18-20ml為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應(yīng)盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質(zhì)，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對(duì)氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺藥和TMP的活性。

6.2細(xì)菌接種量：細(xì)菌接種量應(yīng)恒定，如太多，抑菌圈變小，能產(chǎn)酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。

6.3藥物濃度：藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗(yàn)的結(jié)果，需配制。

6.4培養(yǎng)時(shí)間：一般培養(yǎng)溫度和時(shí)間為37℃、12-24小時(shí)，有些抗菌藥擴(kuò)散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養(yǎng)基，先置4℃冰箱內(nèi)2-4小時(shí)，使抗菌藥預(yù)擴(kuò)散，然后再放37℃溫箱中培養(yǎng)，可以推遲細(xì)菌的生長(zhǎng)，而得到較大的抑菌圈。

7.應(yīng)用

藥敏實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)選擇高敏藥物進(jìn)行治療，也可選用兩種藥物協(xié)助使用，以減少耐藥菌株。在選擇高敏藥物時(shí)應(yīng)考慮藥物的吸收途徑，因?yàn)槲覀兯幟魧?shí)驗(yàn)是藥液直接和細(xì)菌接觸，而在給禽用藥的時(shí)候，必須通過(guò)機(jī)體的吸收才能使藥物達(dá)到一定的效果，所以在給禽用藥時(shí)，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，這樣才會(huì)達(dá)到好的治療效果。

附表2 山東省2004年1-5月份大腸桿菌和沙門氏菌常用藥物敏感程度參考表

藥物	大腸桿菌（細(xì)菌）				沙門氏菌（細(xì)菌）
藥物	QD-1（菌株）	LC-5	JN-7	LY-1	RZ-5	QD-2	JN-8	LY-1
新霉素	20（抑菌）	18	14	25	26	23	18	16
先鋒必	28	26	30	29	32	33	31	26
氟苯尼考	22	21	14	18	30	28	24	21
慶大霉素	15	0	0	12	19	17	12	12
諾氟沙星	10	12	13	12	20	20	11	21
氧氟沙星	12	13	13	11	23	22	15	12
先鋒五號(hào)	19	23	20	18	28	26	21	22
蒽諾沙星	12	14	15	13	20	16	13	16
丁胺卡那	17	19	12	22	32	30	14	22

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