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| 供貨周期 | 一周 | 應用領域 | 生物產業 |
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NuSmart®植物組織PCR試劑盒
（免核酸提取）
試劑盒應用
本試劑盒適用于煙草、擬南芥、水稻、大豆、油菜、玉米、小麥等葉片和種子的PCR、熒光定量PCR 檢測。使用該試劑盒無需液氮研磨，無需使用有機試劑，無需重復離心便可獲得用于PCR反應的基因組模板。
依托Nu-Smart®平臺DNA-Lysis采用zhuan利配方，5分鐘內獲得花瓣、花蕊、種子、葉片、根、莖等樣本的基因組DNA。葉片僅僅需取材1-4mm，取樣量小，減少對樣品的損耗。
預制的2×TaqMix (With Dye)只需要加入引物和模板DNA即可進行PCR反應，減少移液次數，實現高通量擴增。該體系中添加有電泳緩沖液和染料，PCR結束后直接進行瓊脂糖凝膠電泳，使用方便快捷。
本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領域。
試劑盒組成
組分 | Nu-P0101（50T） | Nu-P0102（250T） |
DNA-Lysis | 1 mL | 5 mL |
2×TaqMix (With Dye) | 500 μL | 2×1.25mL |
保存條件
-20oC保存。
使用前將DNA-Lysis室溫充分混勻，經常使用可4℃保存。
2×TaqMix (With Dye)溶解后需置于冰上，避免反復凍融。
需要準備
金屬恒溫浴、PCR儀
使用方法
一、不同樣品的處理方法
1. 葉片的處理
（1）用眼科剪或葉片取樣器剪取1-4mm的葉片。
（2）加入20 μL DNA-Lysis。
（3）充分混勻。
（4）置于55℃作用5分鐘。溶液即為DNA模板。
2. 種子和果實的處理
（1）研磨后種子或1-2mm果肉放入離心管中。
（2）加入20 μL DNA-Lysis。
（3）充分混勻。
（4）置于55℃作用5分鐘。
（5）10,000rpm離心1分鐘，上清即為DNA模板。
二、推薦PCR反應體系
20 μL體系（推薦） | 50 μL體系 | |
2×TaqMix (With Dye) | 10 μL | 25 μL |
引物1 (10 μM)※ | 1 μL | 2 μL |
引物2 (10 μM)※ | 1 μL | 2 μL |
DNA模板 | 0.5-2 μL | 0.5-3 μL |
ddH2O | 補足至20 μL | 補足至50 μL |
※：引物濃度可以在0.1-0.5 μM范圍內進行調節。
三、按照以下方法設定PCR反應
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 95 oC | 5 min | 1 |
變性 | 95 oC |
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35-40 |
退火 | 50~72 oC | 30 s | |
延伸 | 72 oC | 1 kb/min | |
徹di延伸 | 72 oC | 5 min | 1 |
4 oC | Hold | 1 |
注意事項
一、試劑盒使用前注意事項
（1）所有試劑應按照zhi定溫度儲存。請勿反復凍融。
（2）使用前后均需要對操作區進行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無酶耗材。
（3）DNA-Lysis頻繁使用，可在4℃保存。長期不使用可放-20℃保存。
二、樣本注意事項
（1）不同葉片使用不同的取樣器進行處理，防止交叉污染導致檢測結果偏差。
（2）葉片剪取不宜過大，以1-4mm為宜。
（3）種子樣本大小不一，建議研磨后使用。
三、試劑盒使用過程中注意事項
（1）PCR過程中推薦使用陰性對照和陽性對照。
（2）整個過程中使用的吸頭、離心管等耗材應丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，減少環境污染。
（3）2×TaqMix (With Dye)包含染料，可在反應結束后直接進行瓊脂糖凝膠電泳。
（4）不能使用其他品牌的taq酶，進行PCR擴增檢測。
四、試劑盒使用后注意事項
（1）DNA-Lysis處理后的DNA模板可在-20℃保存至少1個月，如需長期保存，可離心后取上清置-80℃保存。避免反復凍融，防止基因組斷裂。
（2）PCR反應完成后，嚴禁在實驗區開蓋。應在污染區進行瓊脂糖凝膠電泳，防止氣溶膠污染。
（3）為防止試劑盒污染，請勿將不同批號試劑盒混用。
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