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斑點和狹線印跡是一種將混合的未經分離的面定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上進行雜交分析的簡單技術。用來檢測被印跡的1DNA制品中靶序列的相對豐度。
實驗方法
- 多樣抽濾法
| 實驗材料 | DNA |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | SSC NaCl NaOH Tris·Cl |
| 儀器、耗材 | 紫外透射儀 電泳儀 多樣抽濾加樣器 |
| 實驗步驟 | 1. 裁一張與多樣過濾加樣器一樣大小的尼龍膜，將膜置于6×SSC的表面讓其自然浸沒。放置10 min。 2. 裁一張與多樣過濾加樣器一樣大小的Whatman 3 MM 濾紙，用6×SSC浸濕。 3. 將Whatman 3 MM 濾紙置于多樣抽濾加樣器上，將膜放置于其上。將多樣抽濾加樣器按廠商說明書安裝好，確保裝置中不漏氣。 4. 在DNA中加入20×SSC使其終濃度為6×SSC，體積為200~400 μl，在100℃變性10 min，然后置于冰中。 5. 連接吸液裝置與多樣抽濾加樣器，每孔中加入500 μl 6×SSC。 6. 將DNA樣品離心5 s，將樣品加于各孔中，小心勿讓吸頭觸及膜，讓樣品濾過。 7. 拆開多樣過濾加樣器裝置，將膜置于一張浸過變性液的Whatman 3 MM 濾紙上，放置10 min。 8. 將膜轉至一張浸過中和液的的Whatman 3 MM 濾紙上。放置5 min。 9. 將膜置于一張Whatman 3 MM 濾紙上，晾干。 10. 將尼龍膜置于可透過紫外線的塑料夾層中，將有DNA的一面朝下置于紫外透射儀上照射適當的時間以固定DNA。 |
