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PeproTech重組細胞因子常見問題解答

2013-4-15　　閱讀(1687)

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PeproTech公司的重組細胞因子產品經過了十分嚴格的生產、純化及質檢過程，保證其在投放市場之前，達到如下要求：
1. 真實性：重組蛋白產品一致經過N末端氨基酸序列分析；必要時應用SDS-PAGE, RP-HPLC和質譜（MS）檢測其真實性。
2. 純度：應用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產品純度。
3. 生物活性：進行相應的體外（in vitro）或體內（in vivo）活性檢測。
4. 蛋白含量：通過紫外光譜分析，SDS-PAGE電泳檢測；必要時應用HPLC定量標準蛋白溶液。
5. 內毒素：kinetic LAL法檢測內毒素。
6. 微生物：重組蛋白在裝瓶之前都經過濾除菌處理。

重組細胞因子的凍干狀態
與市場上已有的其他蛋白產品不同，PeproTech細胞因子不含carrier protein或其他添加物（如BSA、HAS、蔗糖等），而是以低鹽的形式做凍干處理，因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內，形成很薄或不可見的蛋白層。PeproTech的質控過程確保每管裝有非常準確量的蛋白產品。所以我們建議在收到試劑后，務必于開蓋前先離心20-30秒，使可能附于管蓋或管壁的蛋白成分聚集于管低（此時能否見到白色沉淀均屬正常現象）。

重組細胞因子活性單位（units）的換算
各公司在開發出重組細胞因子并檢測其活性后，通常會以ED50（半數有效濃度）或units（活性單位）來標識其細胞因子的生物活性。因此1mg細胞因子中所含的活性單位（units）可以理解為將1mg/ml細胞因子原液稀釋成ED50的稀釋倍數，以下是二者的換算公式：

重組細胞因子的穩定性
除非產品說明書上另有特別說明，否則所有PeproTech蛋白產品都為凍干粉形式，在室溫下也能保持很好的穩定性。但是，我們推薦凍干產品保存于-20℃。大多數凍干產品經溶解和稀釋后，可短時間保存于4℃；若要進行較長時間保存，我們建議稀釋到工作液濃度并加入一定的carrier protein（如0.1% BSA），然后分裝保存于-20℃。請注意每一次凍融過程都會造成蛋白的部分變性，應避免反復凍融。

重組細胞因子的交叉活性
除了少數例外，大多數人類細胞因子對小鼠細胞都有活性。許多小鼠細胞因子對人類細胞也有活力表現，但是與相應的人類細胞因子相比比活力較低。一些人類的細胞因子如IL-7在小鼠細胞中甚至表現出比相應的小鼠細胞因子更高的比活力。而干擾素、GM-CSF、IL-3 和IL-4 是物種特異性的，對于非人類細胞幾乎沒有活性。相反，成纖維細胞生長因子（FGFs）和神經營養因子（neurotrophins）是高度保守的，在其它的動物物種細胞中也能表現很好的活性。

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