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微囊藻毒素的測定方法
閱讀：3040 發(fā)布時間：2020-11-16
下面來講述微囊藻毒素的2種測定方法：
藻細胞破裂后會釋放出多種藻毒素。一般認為它是由肽合成酶復合體合成的生物活性小肽，具有環(huán)狀結構及其氨基酸的特殊結構。影響微囊藻毒素合成的環(huán)境因子較多，主要的有光照、溫度、pH值和營養(yǎng)元素等。有研究結果表明藻毒素是初級代謝產物，其主要作用是通過鰲合使進入藻體內的重金屬離子減輕毒性和抑制其它水生植物并促進其本身的生長。不同藻毒素的功能還有待深入研究。
1.生物毒理檢測法:生物毒理檢測法包括動物毒性法、細胞毒性法。動物毒性法是將純化的微囊藻毒素或水華藍藻中提取的藻毒素通過動物口服或注射來間接評價藻毒素的毒性的一t種方法。根據動物的生理病變及半致死劑量(LD50)可初步確定藻毒素的毒性，這也是毒理評價的常用方法。除個別異構體的LD50為200~250μg/kg外，多數微囊藻毒素LD50為60~70μgkg。動物毒理檢測法操作簡單，但個體差別較大，并不能準確的判定藻毒素類型及結構。因此動物毒理檢測法通常只作為毒性檢測的初篩選方法.另外還有利用毒素對細胞的毒性作用來檢測的方法是細胞毒性檢測技術。這種技術既可以對毒素定性分析還可以定量。谷康定等用2步灌流法制備大鼠原代肝細胞，經MC-LR處理后，數小時后細胞形態(tài)學即發(fā)生改變，其靈敏度可達μg/L級。但該技術操作繁瑣，基本上處于初步研究階段，目前較難大范圍推廣應用。
2.化學分析法:高效液相色譜是目前應用廣泛的方法，具有較高的靈敏度和精密度，依據保留時間定性，一次可以測定多種藻毒素。高效液相色譜可以分離純化、定性或定量檢測微囊藻毒素。一般是先將樣品通過固相萃取吸附富集，溶劑淋洗后洗脫，用于定性、定量分析。另外可采用色質聯(lián)用或與核磁共振聯(lián)用技術確定藻毒素的分子式和結構。對于流動相，一般采用乙腈/水或甲醇/水體系的不同濃度梯度淋洗，在水相中加入一定比例的三fu乙酸或采用酸性的磷酸鹽緩沖溶液以保持酸性(pH 約2.5)，用C18固相萃取柱.對藻毒素進行分離。藻毒素的種類繁多，很多情況下需要測定水體中總藻毒素的濃度。藻毒素均含有側鏈ADDA基團，而藻毒素的毒性與側鏈ADDA基團密切相關，ADDA基團的大吸收峰在238nm處，所以對MC的化學檢測，常采用HPLC/UV法。