差速離心
差速離心法是利用樣品中各種組分的沉降系數(shù)不同而進(jìn)行分離的方法，又稱差分離心或差級(jí)離心。通常兩個(gè)組分的沉降系數(shù)差在10倍以上時(shí)可以用此法分離。在差速離心中細(xì)胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、之后為核蛋白體。
差速離心是指低速與高速離心交替進(jìn)行，使各種沉降系數(shù)不同的顆粒先后沉淀下來，達(dá)到分離的目的。沉降系數(shù)差別在一個(gè)或幾個(gè)數(shù)量級(jí)的顆粒，可以用此法分離。樣品離心時(shí)，在同一離心條件下，沉降速度不同，通過不斷增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。操作過程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開，然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心，分離出第二部分沉淀，如此往復(fù)加高轉(zhuǎn)速，逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)。差速離心方法較簡單，但分辨率不高，沉淀系數(shù)在同一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)的各種粒子不容易分開，常用于其他分離手段之前的粗制品提取。
在差速離心中細(xì)胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、之后為核蛋白體。由于各種細(xì)胞器在大小和密度上相互重疊，而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中，一般重復(fù)2～3次效果會(huì)好一些。差速離心只用于分離大小懸殊的細(xì)胞，更多用于分離細(xì)胞器。通過差速離心可將細(xì)胞器初步分離，常需進(jìn)一步通過密度梯離心再行分離純化。
差速離心 - 優(yōu)點(diǎn)
差速離心法的優(yōu)點(diǎn)是樣品的處理量較大，可用于大量樣品的初分離。其缺點(diǎn)是分離復(fù)雜樣品和要求分離純度較高時(shí)，離心次數(shù)多，操作繁雜。由于沉淀的多次清洗、溶解、再沉淀，容易引起中間損失，所以離心分辨力差。實(shí)際分離時(shí)由于離心時(shí)的對(duì)流、擴(kuò)散和收取沉淀時(shí)的污染，對(duì)于一些沉降系數(shù)相差不大的組分無法進(jìn)行*的分離提純。產(chǎn)品的純度和回收率都達(dá)不到上述理論值。因此差速離心法主要用于大量樣品的初步分離提純。
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