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公司動(dòng)態(tài)
細(xì)胞內(nèi)鈣測(cè)定方法
點(diǎn)擊次數(shù)：1027 發(fā)布時(shí)間：2017-9-11
靜息態(tài)時(shí)[Ca ]i<0.1umol/L。[Ca ]0濃度為1～１.5mmol/L,細(xì)胞內(nèi)外[Ca ]相差104。細(xì)胞膜內(nèi)外的[Ca ]差是細(xì)胞外的Ca 進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的推動(dòng)力。
(組織細(xì)胞以12.5%胰蛋白酶消化20－30 min)
37℃溫育10min, 加入Fura-2/AM（終濃度為2-5ug/ml），37℃恒溫震蕩45 min,負(fù)載后細(xì)胞以含0.2%牛血清白蛋白的Hank’s液洗2次，用Hank’s液調(diào)細(xì)胞數(shù)為1×106，測(cè)定前37℃復(fù)溫5-10 min。
37℃溫育10 min，測(cè)熒光（負(fù)載Fura-2/AM細(xì)胞的熒光比值F）
↓
加Triton X 100 100μl
↓
37℃溫育5 min
↓
340nm測(cè)熒光（zui大值Fmax）
↓
20℃水浴5 min
↓
冰浴 2 min
↓
加EGTA 80μl（40mM）
↓
水浴5 min → 冰浴 5 min
↓
380 nm 測(cè)定熒光（zui小值Fmin）