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技術(shù)文章
士鋒生物蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳實驗步驟
點擊次數(shù)：1493 發(fā)布時間：2013-8-14
一、原理：蛋白質(zhì)分子在一定的PH條件下，由于基團(tuán)解離而帶有一定的電荷，在含有緩沖液的醋酸纖維薄膜上，受電場作用而以一定的速度向一定的方向移動。不同的蛋白質(zhì)分子，由于所帶的電荷不同，移動的方向或速度不同，從而達(dá)到分離。
二、材料與試劑：電泳儀、醋酸纖維薄膜、PH8.6巴比妥緩沖液（稱取10.30g巴比妥1.84g，溶于1000ml蒸餾水中，或者稱取10.3g巴比妥鈉，加1M鹽酸8ml，加蒸餾水至1000ml）、染色液（氨基黑10B1g溶于10ml冰醋酸與90ml甲醇的混合液中）、洗滌液（冰醋酸10ml加甲醇90ml，或者甲醇50ml，冰醋酸10ml，加蒸餾水40ml）、透明液（甘油溶液，或用苯甲醇（折光率1.54），水楊酸甲酯（折光率1.54）等溶液）、微量注射器、蛋白質(zhì)樣品液
三、操作方法
1、醋酸纖維薄膜的準(zhǔn)備：將醋酸纖維薄膜切成10×2.5cm的膜條，浸于巴比妥緩沖液中約30min，充分浸透至無白點，取出用濾紙吸去多余的緩沖液。
2、點樣：用微量注射器將5ul蛋白質(zhì)樣品點在薄膜條中央。
3、電泳：將薄膜條置于電泳儀的支架上，拉直膜條，兩端與濾紙條相接，將濾紙浸入到緩沖溶液中，緩沖液兩槽應(yīng)在同一水平面上，加蓋密封，平衡10min。接通電源，以10-25V/cm的電場強(qiáng)度電泳0.5-1h。
4、顯色：電泳完畢后，取出濾紙條在氨基黑染色液中染色5-10min，然后用漂洗液洗4-5次，直至區(qū)帶清晰為止。