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技巧;醋酸纖維膜電泳詳細說明
點擊次數：1784 發布時間：2013-4-12
醋酸纖維膜電泳是一項簡便而又迅速的方法。它的優點是：①電泳區帶分離清楚，比瓊脂平板電泳分辨率高;②可以定量;③樣品用量少，只需要幾微升即可。
（一）材料與試劑
1.pH8.6離子強度0.05巴比妥緩沖液
2.0.5%氨基黑染色液
3.透明液：冰醋酸 3 份 ;95%乙醇 2 份 混合即可
4.醋酸纖維膜
（二）操作方法
1.將醋酸纖維膜條浸于巴比妥緩沖液中，浸透后用竹鑷子夾到濾紙上，吸去過多的水分。將膜的光滑面向下搭在電泳槽兩側的濾紙橋上，注意搭平。
2.加樣 用微量加樣器于負1.5cm處加樣1µl～3µl，注意樣品要成一條直線且垂直方向。也可用血球計數板蓋玻片蘸取樣品輕輕點上。
3.電泳 電壓10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm電泳45min～60min，至電泳區帶展開約2.5cm～3.5cm時，關閉電源。
4.染色 將膜浸于氨基黑染色液中，染色數分鐘。
5.透明 將染色的醋酸纖維膜浸于透明液中，漂洗5min ~10min，至背景呈乳白色為止。為了防止膜上出現許多氣泡，可以逐漸升高透明液濃度10%、20%以至30%。
6.結果觀察及保存 透明后，將膜貼于玻璃上，干后取下，即可觀察結果并保存。
7.定量 將各區帶剪下，分別浸于4Mol/L NaOH 4ml中，振搖數次，約2h，色澤被浸出，于580nm～620nm比色，測出各區帶的OD值。同時剪一塊大小相似無蛋白的透明膜同樣處理，做為對照。
計算各區帶蛋白含量百分比（以血清為例）
總OD值T=A α1 α2 β γ
白蛋白%=A/T×100%
以此類推。
（三）注意事項
1.醋酸纖維膜孔隙小，含水量少，且較薄，因此它對熱很敏感，故應注意控制電壓、電流。
2.樣品不可過多，只需幾微升即可。
3.加樣一定要呈直線、垂直、分布均勻，這樣泳動的區帶整齊、不歪。
4.注意醋酸纖維膜的質量，浸泡很久仍有大塊白色硬點者可棄之不用。