QQ交談
您所在位置：請輸入產品關鍵字：
郵編：200431
聯系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發送留言
個性化：www.shifengsj.com
網址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://m.js967.com/st236594/
豬腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書
點擊次數：1296 發布時間：2012-9-27
豬腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用。 藥品名稱： 使用目的： 本試劑盒用于測定豬血清、血漿、或其它組織液中腫瘤壞死因子α（TNF-α）含量。 實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平。用純化的豬腫瘤壞死因子α（TNF-α）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子α，再與HRP標記的羊抗豬抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬腫瘤壞死因子α呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬腫瘤壞死因子α（TNF-α）濃度。 試劑盒組成 1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（450ng/L） 0.5ml×1瓶 3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個 標本要求 1．標本采集后盡早進行實驗。 2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 3．可將標本放于 操作步驟 1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為（300 ng/L，200ng/L ，100ng/L，50 ng/L，25 ng/L）。 2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 計算 以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 注意事項 1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。 4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。 5． 嚴格按說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 6．底物請避光保存。 7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 9．本試劑不同批號組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 檢測范圍： 20ng/L -400 ng/L 規格： 96人份/盒 保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6個月