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兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）酶聯免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書
點擊次數：1377 發布時間：2012-9-26
兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）酶聯免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用。 藥品名稱： 通用名：兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）酶聯免疫分析試劑盒 使用目的： 本試劑盒用于測定兔血清，血漿及相關液體樣本中脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）含量。 實驗原理 本試劑盒應用間接法測定標本中兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）水平。用純化的兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）標準品和未知濃度的Lp-PLA2待檢樣品，溫育后，加入生物素標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）濃度。 試劑盒組成 1 20倍濃縮洗滌液 50ml×1瓶 9 標準品S1（6μmol/L） 0.5ml×1瓶 2 鏈霉親和素-HRP 6ml×1瓶 標準品S2（4μmol/L） 0.5ml×1瓶 3 酶標包被板 12孔×8條 標準品S3（2μmol/L ） 0.5ml×1瓶 4 生物素標記的抗-IgG抗體 6ml×1瓶 標準品S4（1μmol/L ） 0.5ml×1瓶 5 顯色劑A液 6ml×1瓶 標準品S5（0.5μmol/L） 0.5ml×1瓶 6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1個 7 終止液 6ml×1瓶 11 封板膜 3張 8 樣品稀釋液 6ml×1瓶 12 說明書 1份 標本要求 1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 操作步驟 1. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。 2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻， 3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。 5. 加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。 6. 洗滌：操作同4。 7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻， 8. 洗滌：操作同4。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻， 10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 計算 以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 注意事項 1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。 4． 如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數（×5×n）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。 7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 線形范圍： 03μmol/L -8μmol/L 規格： 96人份/盒 保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2 2．有效期：6個月