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細(xì)胞融合（Cell fusion）實驗
點擊次數(shù)：1464 發(fā)布時間：2016-12-14
實 驗 原 理
誘導(dǎo)細(xì)胞融合的主要方法有：病毒誘導(dǎo)融合，化學(xué)融合劑誘導(dǎo)融合和電融合。
1. 病毒誘導(dǎo)融合：有許多種類的病毒能介導(dǎo)細(xì)胞融合，zui常用的是滅活的仙臺病毒（HVJ），為RNA病毒。病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的過程有：首先是細(xì)胞表面吸附許多病毒粒子，接著細(xì)胞發(fā)生凝集，幾分鐘至幾十分鐘后，病毒粒子從細(xì)胞表面消失，而就在這個部位鄰接的細(xì)胞的細(xì)胞膜融合，胞漿相互交流，zui后形成融合細(xì)胞。
2. 化學(xué)融合劑誘導(dǎo)融合：化學(xué)融合劑主要有脂肪酸衍生物、脂質(zhì)體、鈣離子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白質(zhì)和多肽，其中zui常用的是聚已二醇（PEG）。PEG用于細(xì)胞融合至少有兩方面的作用：①可促使細(xì)胞凝結(jié)；②破壞互相接觸處的細(xì)胞膜的磷脂雙分子層，從而使相互接觸的細(xì)胞膜之間發(fā)生融合，進(jìn)而細(xì)胞質(zhì)溝通，形成一個打的雙核或多核融合細(xì)胞。
3. 電融合：是指細(xì)胞在電場中極化成偶極子，并沿著電力線排列成串，然后用高強度、短時程的電脈沖擊穿細(xì)胞膜而導(dǎo)致細(xì)胞融合。
細(xì)胞融合技術(shù)在基因定位、基因表達(dá)產(chǎn)物、腫瘤診斷核治療、生物新品種培育及單克隆抗體技術(shù)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用前景。單克隆抗體技術(shù)就是通過細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來的，在生命科學(xué)研究核應(yīng)用方面產(chǎn)生了重大影響。
實 驗 操 作
在公雞翼下靜脈抽取2ml雞血，加入盛有8ml的Alsever液中，使血液與Alsever液的的比例達(dá)1∶4，混勻后可在冰箱中存放一周；
細(xì)胞融合加入0.3ml的GKN溶液，制成細(xì)胞懸液；（也可以用血球計數(shù)板計數(shù)，用GKN液將其調(diào)整為106個/ml）；
取以上細(xì)胞懸液0.2ml放入1ml的EP管中，然后放入37℃水浴中預(yù)熱，同時將50％PEG液一并預(yù)熱20min；
20min后將0.2ml的50％PEG溶液逐滴沿離心管壁加入到0.2ml細(xì)胞懸液中，邊加邊搖勻，然后放入37℃水浴中保溫20min；
20min后，加入GKN溶液1ml，靜止于水浴中20min左右；
1500r/min離心5min，棄去上清，加GKN溶液再離心1次；
棄去上清，加入GKN液少許，混勻，取少量懸浮于載玻片上，加入詹納斯綠染液，用牙簽混勻，3min蓋上蓋玻片，觀察細(xì)胞融合情況。