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染色體銀染色法
點(diǎn)擊次數(shù)：2136 發(fā)布時(shí)間：2016-11-3
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
通過實(shí)驗(yàn)，掌握染色體銀染方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
銀染核仁成形區(qū)的方法，zui早是Goodpasture 和Bloom(1975)提出的Ag-As技術(shù)。應(yīng)用這種技術(shù)使人類、哺乳動(dòng)物、兩棲類、植物等的核仁形成區(qū)(NOR)特異性染為黑色。這種銀染色陽性的NOR稱為Ag-NOR。
銀染方法的原理可能是由于轉(zhuǎn)錄的rDNA部分有豐富的酸性蛋白，它們具有S－H鍵和S－S鍵，容易將Ag+還原為Ag的顆粒，從而在活性的核仁形成區(qū)鍍上銀，呈現(xiàn)為黑色的區(qū)域。本實(shí)驗(yàn)將介紹染色體核仁形成區(qū)的銀染顯示法（Ag-NOR），并了解Ag-NOR的多態(tài)現(xiàn)象。
三、實(shí)驗(yàn)材料
兩棲類或小白鼠骨髓細(xì)胞染色體制片不經(jīng)染色留用的標(biāo)本片。
四、實(shí)驗(yàn)器具和藥品試劑
顯微鏡、冰箱、恒溫水浴鍋、溫度計(jì)、大培養(yǎng)皿、燒杯、吸管、滴瓶、切片架、切片盒、鑷子。
硝酸銀、明膠、甲酸、擦鏡紙。
五、實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 把大培養(yǎng)皿放入水浴中，升溫至65～70℃，同時(shí)用燒杯預(yù)熱蒸餾水。
(二) 將標(biāo)本片平放在預(yù)熱的培養(yǎng)皿墊枕上，用50％硝酸銀溶液與2％明膠溶液以2：1混勻后，立刻滴加到染色體制片上，復(fù)以蓋片（或擦鏡紙）。
(三) 待反應(yīng)液由無色透明變黃，zui后變成棕褐色后（約2～4分鐘），立即取出載片，用預(yù)熱的蒸餾水*沖洗，晾干后鏡檢。染色適度的片子，染色體為金黃色，NORS為黑色。
注意事項(xiàng)：
(一) 用于Ag-NOR染色的染色體標(biāo)本，是新鮮制備的，以一周以內(nèi)的制片為好，同時(shí)片內(nèi)要求有眾多的分裂相。
(二) 銀染用的兩種反應(yīng)液新配，一時(shí)用不完可裝棕色瓶中，冰箱４℃保存，但不得超過10天。
(三) 配制和使用硝酸銀溶液時(shí)要格外小心，不要滴灑在地上、桌上及手上等處，氧化為黑色的污點(diǎn)極難除去。
(四) 在明膠中添加甲酸可促進(jìn)反應(yīng)過程（2克明膠＋99毫升蒸餾水＋1毫升甲酸）。