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技術(shù)文章
孚爾根[Feulgen]核反應(yīng)染色法
點擊次數(shù)：4621 發(fā)布時間：2016-10-27
一、實驗?zāi)康?br />學(xué)習(xí)和掌握孚爾根反應(yīng)染色法，鑒定植物細胞核內(nèi)染色體上DNA的存在。
二、實驗原理
DNA是主要的遺傳物質(zhì)，集中于染色體上。1924年孚爾根首先用席夫試劑(Schiff)作試驗，鑒定了染色體上DNA的存在，故稱為孚爾根染色法。孚爾根染色法的反應(yīng)原理主要與席夫試劑的化學(xué)性質(zhì)有關(guān)，此試劑的基本成分是堿性品紅，偏亞硫酸氫鈉(NaHSO3)和鹽酸.堿性品紅的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。
堿性品紅原為桃紅色，當(dāng)與亞硫酸作用時還原，使醌型變?yōu)楸叫停商壹t色變?yōu)闊o色透明的N-亞磺酸亞硫酸副品紅堿，當(dāng)它與醛基作用時，其分子式又恢復(fù)為醌型結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)紫紅色，其反應(yīng)式見圖8-1。
利用1N HCl 、60℃下水解時，可將DNA分子中嘌呤堿基與去氧核糖之間的糖苷鍵打斷，使嘌呤脫下，并使去氧核糖C-1位置釋放醛基與席夫試劑反應(yīng)顯紫紅色。細胞中只有DNA才具有這種專一的孚爾根反應(yīng)，因此利用孚爾根反應(yīng)，可以鑒定DNA的存在。并廣泛應(yīng)用于核及染色體的研究中。
孚爾根[Feulgen]核反應(yīng)染色法
孚爾根[Feulgen]核反應(yīng)染色法