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技術文章
巨噬細胞原代培養
點擊次數：1544 發布時間：2016-9-26
1．實驗前三天，向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內）。
2．引頸殺死動物，手提鼠尾將全鼠浸入70％酒精中3～5秒。
3．置動物于解剖臺上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁。
4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中，同時從兩側用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內充分流動。
5．用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內。
6．小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250g 4℃離心10分鐘，去上清，加10 ml Eagle培養基。
7．計數細胞，每只小鼠可產生20～30×105細胞，其中90％為巨噬細胞。
8．為獲取3×105個帖附細胞/平方厘米，需接種2.5×106/ml。
9．為純化培養細胞，去除其它白細胞，接種數小時后，去除培養液，用Eagle液沖洗1～2次后，再加新Eagle培養液置37℃ CO2溫箱中培養。