Cell Counting Kit-8是一種廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性檢測的試劑盒。其核心成分是水溶性四唑鹽，在細胞存活狀態(tài)下，可以被細胞內(nèi)的脫氫酶還原為橙黃色的水溶性甲臜產(chǎn)物。通過測定甲臜產(chǎn)物的吸光度，可以間接反映細胞的存活情況和增殖能力。
一、工作原理
Cell Counting Kit-8的工作原理基于顏色變化。WST-8是一種類似于MTT（四唑鹽）的水溶性化合物，但其毒性更低，更適合用于細胞活性檢測。在細胞存活狀態(tài)下，細胞內(nèi)的脫氫酶可以將WST-8還原為橙黃色的甲臜產(chǎn)物（Formazan）。甲臜產(chǎn)物的生成量與活細胞的數(shù)量成正比，因此可以通過測定甲臜產(chǎn)物的吸光度來評估細胞的存活情況和增殖能力。
具體步驟如下：
細胞接種
將待測細胞接種到96孔板中，每孔加入一定數(shù)量的細胞。
加入Cell Counting Kit-8試劑
在細胞培養(yǎng)一定時間后，向每孔中加入適量的試劑。可以直接加入到細胞培養(yǎng)基中，無需去除原有的培養(yǎng)基。
測量吸光度
使用酶標儀測定每孔中甲臜產(chǎn)物的吸光度。吸光度的大小與活細胞的數(shù)量成正比，從而可以計算出細胞的存活率和增殖能力。
二、應(yīng)用領(lǐng)域
細胞增殖檢測
廣泛用于檢測細胞的增殖能力，適用于各種類型的細胞，包括腫瘤細胞、原代細胞和干細胞等。
細胞毒性檢測
可以用于評估藥物、化學物質(zhì)和其他因素對細胞的毒性作用。通過比較處理組和對照組的吸光度，可以計算出細胞的存活率和毒性指數(shù)。
藥物篩選
在高通量藥物篩選中具有重要應(yīng)用，可以快速評估大量化合物對細胞的影響，幫助研究人員篩選出具有潛在治療價值的候選藥物。
疾病研究
可用于研究疾病的發(fā)生機制和進展，例如腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移、神經(jīng)退行性疾病等。
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