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以FaTEx-gen快速凈化萃取套組搭配液相層析串聯質譜分析谷類樣體中之多重霉菌毒素

應用批注

霉菌毒素

緒論

霉菌毒素為霉菌增殖時產生的次級代謝產物，常見于生活中，且霉菌的孢子能透過空氣、風力、水流和動物等方式來傳播。只要有少量蛋白質、淀粉、脂質及水份，就是適合真菌生長的環境，因此麥類、果實類、玉米及花生都是真菌主要的生長處。黃曲毒素具有潛在性的肝毒害（hepatoxin）及致癌性，其化學特性使其能于運輸儲存期間穩定存在，因此霉菌毒素易出現在食物鏈中；且除了直接食用受感染的食物，也可能透過喂食受污染飼料給動物而間接暴露于相關風險。

　　霉菌毒素污染食品和飼料對于全球性作物及動物養殖產業影響甚巨，據估計每年約25%農作物受到不同程度的霉菌毒素影響，單以美國和加拿大而言，真菌毒素即造成飼料業和家畜業每年損失約50億美金(IFST, 2006)。

　　本篇應用以FaTEx-gen快速凈化萃取套組進行前處理，搭配LC-MS/MS檢測黃曲毒素的含量，建立一套快速的檢測方法，利于維護飼料質量及相關作物食品安全。

摘要

本研究以FaTEx快速凈化萃取套組，分析谷類樣品中之十一項霉菌毒素，包含黃曲毒素類、赭曲毒素A及鐮孢菌毒素類（伏馬毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（嘔吐毒素）、玉米赤霉毒素等），項目列表詳見表1。

　　針對霉菌毒素的檢測，通常會依其種類選用相對應的特化免疫親和管進行分析。此類免疫親和管柱的分析效能具有專一性，因此能分析的項目較限縮，通常為專項，或者有較多項的例如黃曲毒素專用管則可同時分析黃曲毒素 B1、B2、G1、G2四項。然而在欲達成各種類多重毒素分析的目的時，于檢測時程上便會較耗時，且使用相對應特化管柱的成本也高許多。

　　本篇使用FaTEx凈化套組，搭配ZORBAX Eclipse Plus C18通用管柱及Agilent 6470液相層析串聯式質譜儀，檢測黃豆及花生樣品，樣品之標準品添加濃度如表二；樣品制備流程如下，樣品秤樣后加標靜置，加入12mL 70:30 (v:v)乙腈/水溶液（含0.5%甲酸）以高速震蕩機震蕩30分鐘，于3500rpm離心5分鐘，取上清液5mL經過FaTEx套組凈化，取檢液1.2mL以氮氣吹至微干，再以1mL 50:50 (v:v)乙腈/水溶液回溶。分析結果如表三所示，回收率落在81.9~112.7%范圍內，CV%皆小于20，顯示此為一快速、穩定之檢驗方法。

前處理步驟

液相層析參考條件

移動相流速：0.4 mL/min

進樣體積：5µL

層析管柱：ZORBAX Eclipse Plus C18   Rapid Resolution HD   1.8μm,內徑3.0 × 100 mm

流動相溶液

表1、霉菌毒素11項藥劑之多重反應偵測模式參數

結論

本篇以FaTEx-gen萃取凈化套組搭配ZORBAX Eclipse Plus C18管柱于液相串聯質譜之分析方法，檢測谷類樣品（黃豆及花生）之多重霉菌毒素（黃曲毒素類、赭曲毒素A及鐮孢菌毒素類）共11項，每次分析時間13分鐘，為快速之檢驗方法。

FaTEx-gen萃取凈化套組可針對復雜檢體基質加強凈化，降低基質干擾。

以FaTEx-gen套組檢測添加多重毒素標準品之谷類樣品（添加濃度：黃曲毒素B1 Aflatoxin B1,黃曲毒素B2  Aflatoxin B2,  黃曲毒素G1  Aflatoxin G1,  黃曲毒素G2 Aflatoxin G2,赭曲霉毒素 A  Ochratoxin A：2.5 ng/g，T-2 toxin, HT-2 toxin：5 ng/g；嘔吐毒素Deoxynivalenol, 玉米赤霉烯酮 Zearalenone：25 ng/g；伏馬毒素 B1  Fumonisin B1,伏馬毒素 B2  Fumonisin B2：100 ng/g）回收率落在81.9~112.7%范圍內，變異系數皆小于20，為穩定之檢驗方法。