化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1958 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 正常脊髓組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 不規(guī)則細胞 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠DRG神經(jīng)元細胞 | 商品貨號 | A01X1958 |
組織來源 | 正常脊髓組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 本細胞為終末分化細胞，增殖能力很弱，建議客戶收到細胞后直接用于后續(xù)實驗，不要進行擴增培養(yǎng)。 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 不規(guī)則細胞 |
細胞簡介 |
DRG為軀體內(nèi)臟初級感覺中樞，富含周圍神經(jīng)系統(tǒng)感覺神經(jīng)元。 神經(jīng)元是構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。神經(jīng)元具有長突起，由細胞體和細胞突起構(gòu)成。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代DC細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈不規(guī)則細胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
猴胎腎細胞；MARC145/Gal-8
人乳腺癌細胞；MCF-7/HER2
小鼠雜交瘤細胞株；SZCIQASFV1
小鼠雜交瘤細胞株；GPC3-1H5
小鼠雜交瘤細胞株；NS3-2A5-E1-H2
小鼠雜交瘤細胞株；SZCIQASFV2
人源性腎透明細胞癌細胞舒尼替尼耐藥株；7SuR
小鼠雜交瘤細胞株；1-E11
小鼠雜交瘤細胞株；GP73-5B4-G6-C9-C6-G4
人源性腎透明細胞癌細胞舒尼替尼耐藥株；ACSu
幼倉鼠腎傳代細胞；BHK21
小鼠雜交瘤細胞株；5M1
小鼠雜交瘤細胞株；4-C3
小鼠雜交瘤細胞株；PEAA-3B5
小鼠雜交瘤細胞株；8B7
Agar medium C
肉湯培養(yǎng)基D
Broth medium D (Lactose monohydrate broth)
增菌肉湯培養(yǎng)基E
Enrichmentbroth medium E
瓊脂培養(yǎng)基F
Agar medium F
肉湯培養(yǎng)基G
Broth medium G(MacConkey broth)
瓊脂培養(yǎng)基H
小鼠DRG神經(jīng)元細胞Agar medium H(MacConkey agar)
肉湯培養(yǎng)基I
Broth medium
瓊脂培養(yǎng)基J
Agar medium J (Deoxycholate citrate agar)
化工儀器網(wǎng)