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細(xì)胞感染方法
閱讀：143 發(fā)布時(shí)間：2016-7-1（一）細(xì)胞準(zhǔn)備
將狀態(tài)良好的目的細(xì)胞接種到24孔板，使細(xì)胞濃度為1×105/ml細(xì)胞，接種細(xì)胞數(shù)量因細(xì)胞的生長(zhǎng)速度而略有不同，一般是保證第二天進(jìn)行病毒感染的時(shí)候細(xì)胞匯合率介于50%至70%之間。ELISA試劑盒
（二）病毒感染
1.感染細(xì)胞*佳MOI的測(cè)定MOI（MultiplicityofInfection，感染復(fù)數(shù)）是指每個(gè)細(xì)胞感染的病毒數(shù)，通常MOI越高，病毒整合到染色體的數(shù)量以及目的蛋白的表達(dá)量越高。對(duì)于分裂活躍的細(xì)胞，比如Hela、293細(xì)胞，MOI=1～3時(shí)，80%以上的細(xì)胞均表達(dá)目的基因。而對(duì)于非分裂細(xì)胞，比如原代細(xì)胞，感染效率較低。需要進(jìn)行MOI梯度摸索實(shí)驗(yàn)，選擇適合的MOI進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2.感染步驟
按實(shí)驗(yàn)需要將細(xì)胞鋪板（比如12孔板）；細(xì)胞數(shù)以第2天密度約50%為宜；37℃培養(yǎng)。
對(duì)于Polybrene可施加的細(xì)胞：準(zhǔn)備*培養(yǎng)基和Polybrene混合物，Polybrene終濃度為摸索得到的zui適終濃度。移去培養(yǎng)基并添加0.5mlPolybrene/培養(yǎng)基混合物于每孔中（適用于24孔板，其他孔板請(qǐng)相應(yīng)調(diào)整體）。
對(duì)于不適用Polybrene的細(xì)胞，以上步驟省略，直接進(jìn)入下面步驟：
感染前，從冰箱取出并在37℃水浴中快速融化病毒，吸去細(xì)胞原有培養(yǎng)基，將病毒原液加入細(xì)胞中，輕輕8字混勻。感染后第二天（約12小時(shí)），吸去含病毒的培養(yǎng)液，換上新鮮的*培養(yǎng)液，繼續(xù)37℃培養(yǎng)。感染后48小時(shí)，對(duì)于帶GFP報(bào)告基因的病毒，可通過熒光顯微鏡觀測(cè)GFP表達(dá)效率，對(duì)于攜帶Puromycin抗性基因的病毒，換上含適當(dāng)濃度的Puromycin的新鮮*培養(yǎng)液，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞株。
LAS2 肺腺瘤易感蛋白2抗體
phospho-LEO1(Ser551) 磷酸化RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體
LATS2 腫瘤抑制基因LATS2抗體
phospho-LSP1 (Ser204) 磷酸化白細(xì)胞F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體
phospho-LATS2 (Ser83) 磷酸化腫瘤抑制基因LATS2抗體
phospho-LSP1 (Ser252) 磷酸化白細(xì)胞F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體
LSP1 白細(xì)胞F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體
LZTFL1 亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子樣1抗體
Laminin B2 gamma 1 層粘連蛋白B2γ1抗體
Phospho-LAT (Tyr161) 磷酸化T細(xì)胞活化連接蛋白抗體
Phospho-LAT (Tyr200) 磷酸化T細(xì)胞活化連接蛋白抗體
LRP1/CD91 低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1抗體
LPCAT2 磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶2抗體