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ELISA試驗中注意的細節(jié)
閱讀：148 發(fā)布時間：2015-3-121.不管是ELISA試劑盒，還是其它產(chǎn)品，在使用之前我們都要仔細閱讀說明書。
2.同樣的，一定要確定試劑盒是不是在有效期內(nèi)。
3.按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）。
4.標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存。
5.ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應(yīng)包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。
6.標準品的配制：對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書，注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復溶。
7.一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的elisa操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
8.根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量。
9.按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑，DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南。
10.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。
11.為了優(yōu)化靈敏度，建議過*孵育標準品和標本。
12.若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
13.當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
14.準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等。