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技術(shù)文章

用鑒定試劑盒做微生物生化鑒定操作流程與注意事項

閱讀:2057          發(fā)布時間:2021-5-17

生化鑒定試劑盒HiBio-ID™,試劑盒包含生化鑒定卡、輔助試劑、結(jié)果詮釋表和標準菌種表。一個生化鑒定卡上集成了12種或24種生化試驗,將反應(yīng)后的顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》、《菌種標準表》比對后,從而對菌種作出鑒定。

操作流程:

1,準備接種液

①待測菌株需要先分離純化。只有純化的菌株才能用于檢測。可用普通培養(yǎng)基如營養(yǎng)瓊脂(#M001)或適合的鑒別培養(yǎng)基分離菌株。(具體培養(yǎng)基以說明書為準)

②挑取單個菌落,接種到5ml腦心浸出液肉湯,在35-37℃培養(yǎng)4-6小時,直到菌液濁度達到產(chǎn)品說明書上的要求。一些苛養(yǎng)菌可能需要孵育6小時以上。在這種情況下,孵育應(yīng)使接種液濁度達到OD值或McFarland濁度標準。

③遵循產(chǎn)品說明書的要求操作。

注意:如果接種液濁度<0.1OD或0.5 McFarland標準,可能會得到錯誤的假陰性結(jié)果。

2,接種

①無菌打開試劑盒,撕去密封箔。

②采用表面接種方法,在鑒定卡上每孔加50μl上述接種液。每孔用接種環(huán)涂抹接種。

3,孵育

HiBio-ID™生化鑒定卡中,貨號為KB001--KB014的產(chǎn)品,均在35℃±2℃培養(yǎng)18-24小時,只有KB006例外,需在室溫(22-25℃)孵育48-72小時。

4,試劑

必要時需要添加其他顯色試劑,培養(yǎng)結(jié)束后,個別微孔需要加入1-2滴顯色劑,等待幾秒鐘或幾分鐘。顏色發(fā)生變化。

5,讀取結(jié)果

人工讀取結(jié)果:顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》比對,確定是否存在陽性反應(yīng)。再根據(jù)《菌種標準表》完成鑒定/或用HiBio-ID™Readers生化鑒定儀鑒定。

注意事項:

1. 試驗前,將試劑盒從冰箱取出,放置在室溫。

2. 某些菌的糖發(fā)酵可能不顯著,這時可記錄為±,孵育延長至48小時。之后顯示為橘黃色則為陰性。

3. 對于賴氨酸和鳥氨酸脫羧試驗,孵育可能需要延長至48小時。

4. 如果菌種出現(xiàn)矛盾的結(jié)果,可能因為菌種突變或用于分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基的緣故。

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