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人ELISA試劑盒詳解樣品的各步操作方法：
A、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
B、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)，1000×g離心30分鐘去除顆粒。
C、血清：操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，使用不含熱原的試管，收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
D、組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎，1000×g離心10分鐘，取上清液。
E、保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍，盡可能的不要使用溶血或高血脂血，如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾，不要在37℃或更高的溫度加熱解凍，應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
詳細(xì)留意事項(xiàng)：
1、血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下。
2、冰凍保存的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，然后引起假陰性成果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意，不要進(jìn)行劇烈振動(dòng)，重復(fù)倒置混勻即可。
3、標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉積后取上清檢測(cè)。
4、要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性，因而，在以HRP為符號(hào)酶的ELISA測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡(jiǎn)單在溫育過(guò)程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。
5、樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的成長(zhǎng)，其所排泄的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測(cè)定方法發(fā)生非特異性攪擾。
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