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分光光度計工作原理及測定方法
2016-7-27 閱讀(2373)
分光光度計工作原理
分光光度計測量根據朗伯一比耳定律A=KCL,其中A為吸光度,K為吸光系數,C為溶液濃度,L為液層厚度。雖然,分光光度計是比較精密的儀器,但它不可能無限地符合朗伯一比耳定律。儀器的靈敏度不同,它所檢測溶液濃度的范圍也不同。當檢測物質的濃度較高時,將會對單色光產生大量的吸收,使達到檢測器的能量較弱,超出儀器的檢測的范圍。同樣,當被測物質很稀時,溶液對單色光的吸收很少,因而,達到檢測器的光的能量較高,從而使檢測器處于臨界飽和狀態下工作,在這些情況下,儀器對樣品的檢測將會發生嚴重的失真。所以每臺儀器都有一定的測量范圍,都有一定的靈敏度。
朗伯一比耳定律是對單色光而言,但實際上,目前各種分光光度計分光后所得到的光,一般都是復合光,即或多或少含有在工作波長附近的雜散光,同樣,單色器的出射狹縫總有一定的寬度,出射的光一般都是一個波段的光,這些雜散光會引起朗伯一比耳定律的偏離。檢測方法是利用一些溶液只對某一波長的光有較強的吸收,而對其附近波長的光不吸收,當儀器在此波長下測量很濃的這些樣品,其透過率應為零,但由于有雜散光的存在,其讀數不一定為零。
分光光度計測定方法
測定靈敏度時,采用如下的指標:
(1)在波長440nm處測量濃度為30ppm與32.5ppm的K2Cr2O7的H2SO4溶液(以0.1NH2SO4溶液為空白),其吸光度A之差應不小于0.01A。
(2)在波長為510nm處,測量濃度為2000ppm與2150ppm的CoCl2的HCl溶液(以0.1N的HCl溶液為空白),其吸光度A之差應不小于0.01A。
(3)在波長為690nm處,測量濃度為2000ppm與2150ppm的CuSO4的H2SO4溶液(用0.1N的H2SO4溶液為空白),其吸光度A之差應不小于0.01A。
測定雜散光時、采用如下的指標:
(1)對于可見光分光光度計,用蒸餾水作參比,在620nm處,用10mm石英比色皿,測量0.005%的亞甲藍,其透過率應小于1%。
(2)對于紫外分光光度計:
(a)用10mm石英比色皿,用蒸餾水作參比,在310nm處,測量分析純丙酮,其透過率應小1%。
(b)用10mm石英比色皿,用蒸餾水作參比,在210nm處,測量0.1mol/L的NaBr溶液,其透過率應小于1%。
