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細胞復蘇操作步驟:
1.將冷凍管迅速由液氮轉入到37℃水浴中,冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染,不定時攪拌加速解凍;
2.當細胞*解凍后,用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒;
3.將解凍后細胞轉移到含4℃預平衡培養液的試管中;
4.細胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘;
5.棄上清,將細胞重新懸浮在新鮮培養液中;
6.將細胞轉移到細胞培養瓶,CO2孵箱中培養;
7.是用倒置顯微鏡檢查細胞存活率以及細胞密度,如果細胞密度過高,用培養液稀釋至適宜濃度。
培養條件:
*培養基:DMEM高糖培養基90%;胎牛血清10%。
培養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
傳代方法:
收到細胞后,取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。 (一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整 個瓶消毒后放到超菌 臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,吸出培養液,僅留下 10ml培養液在瓶內繼 續培養。
(二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養。