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檢測(cè)大腸桿菌的分子生物學(xué)方法

2012-12-1  閱讀(1760)

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傳統(tǒng)的細(xì)菌分離、培養(yǎng)及生化反應(yīng),已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足對(duì)各種病原微生物的診斷以及流行病學(xué)的研究。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,特別是免疫學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)及計(jì)算機(jī)技術(shù)的不斷發(fā)展,新的微生物診斷技術(shù)和方法已廣泛被應(yīng)用。近來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者不斷努力,已創(chuàng)建不少快速、簡(jiǎn)便、特異、敏感、低耗且適用的微生物診斷方法,尤其是DNA探針和以PCR為代表的分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及自動(dòng)化儀器的應(yīng)用已明顯加快了微生物檢驗(yàn)的速度,明顯提高了微生物的診斷水平。

近年文獻(xiàn)表明,核糖分型不能用來(lái)鑒定EHEC0157:H7血清型之間的菌株。脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulsed-fieldgelelectrophoresis,PFGE)和噬菌體分型是zui有價(jià)值的鑒定技術(shù),PFGE作為一種DNA指紋圖被廣泛利用,且優(yōu)于其他DNA分析方法,它已成功地應(yīng)用于對(duì)部分菌落進(jìn)行分類。

將檢查的VT基因型以PCR底物酶切后,經(jīng)PFGE分析其限制性片段長(zhǎng)度的多態(tài)性。Bohn和Karch用此法證實(shí)了德國(guó)一次流行的26個(gè)菌株為相似的譜型。蘇格蘭的Krause用此法分析的124個(gè)菌株,可分為12個(gè)噬菌體型,其中2型和49型占所研究噬菌體型的63.7%。

據(jù)報(bào)道,現(xiàn)已確定66種噬菌體型,應(yīng)用噬菌體分型在美國(guó)分出24個(gè)型,流行株以1型、2型、4型、49型為主。加拿大暴發(fā)分離的13個(gè)菌株和美國(guó)內(nèi)布拉斯分離的3個(gè)菌株均為1型,美國(guó)北卡羅來(lái)那洲暴發(fā)分離的4個(gè)菌株為2型。因此,噬菌體分型對(duì)預(yù)測(cè)VT有一定的參考價(jià)值。不同的噬菌體產(chǎn)生VT的特點(diǎn)不同,既能產(chǎn)生VTl,又能產(chǎn)生VT2的有1型、8型、14型,而2型、49型只產(chǎn)生VT2。
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