土壤過(guò)氧化氫酶 （Solid- Catalase    S- CAT）試劑盒說(shuō)明書 

微量法

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

規(guī)格 ： 100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 × 1  瓶，4℃保存； 臨用前加入29 .7mL  蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑4℃ 保存；

試劑二：粉劑× 1  瓶，4℃保存；臨用前加入1mL  蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存； 試劑三：液體× 1  瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：

S-CAT  是土壤微生物代謝的重要酶類，在H2O2 清除系統(tǒng)中具有重要作用。

H2O2   在240nm  下有特征吸收峰，通過(guò)測(cè)定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長(zhǎng)下吸光度的變化，即可 反應(yīng)S-CAT  活性的高低。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板 (UV 板) 和蒸餾水

操作步驟：

-、     樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37  度烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50   目篩。

、   測(cè)定步驟：

1 、  分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至240nm ，蒸餾水調(diào)零。

2 、 加樣表

試劑名稱測(cè)定管無(wú)基質(zhì)管無(wú)土管

風(fēng)干土樣 (g)0.030.03

試劑一 (μL)260260

雙蒸水 (μL)260

25℃振蕩培養(yǎng) 20min

試劑二 (μL)101010

混勻 8000g ，25℃離心 5min ，取全部上清

試劑三 (μL)303030

混勻，取200uL  至微量石英比色皿或96  孔板中，240nm  處記錄各管吸光值A(chǔ)。 注意：  每個(gè)測(cè)定管要設(shè)一個(gè)無(wú)基質(zhì)管，無(wú)土管只要做一管。

三、      S-CAT 活性計(jì)算：

A 、用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義：每天每g  風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2   降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：S-CAT   (μmol/d/g) ＝[(A  無(wú)土管-A  測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)×V  反總÷   ( ε×d) × 106]÷W÷T= 16.5 ×   (A  無(wú)土管-A  測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)

V  反總：反應(yīng)體系總體積，3 × 10-4 L ；ε  ：過(guò)氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36× 104 L / mol /cm；d： 比

色皿光徑，1cm；  T ：反應(yīng)時(shí)間，20 min= 1/72d；  W：樣本質(zhì)量，0.03g。

B 、用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義：每天每g  風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2   降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：S-CAT   (μmol/d/g) ＝[(A  無(wú)土管-A  測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)×V  反總÷   ( ε×d) × 106]÷W÷T=33 ×   (A  無(wú)土管－A  測(cè)定管+A  無(wú)基質(zhì)管)

V  反總：反應(yīng)體系總體積，3 × 10-4 L ；ε ：過(guò)氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36× 104 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；  T ：反應(yīng)時(shí)間，20 min= 1/72d；  W：樣品質(zhì)量，0.03g。

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