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二級A2型生物安全柜工作原理：空氣由前新風口進入負壓風道與柜體內空氣充分混合后，由風機送入靜壓箱，經過濾器過濾后以垂直層流的狀態進入操作區，操作區左右及后部墻體均為負壓風道，使工作區與外部環境形成氣幕及箱體雙層隔離。同時工作區被負壓包圍，保證樣品不發生泄漏，操作區的氣流由于排風機的作用，通過負壓風道與新風口進入的空氣混合后，其中部分混合氣體(約70%)由風機送入靜壓箱循環使用，其余混合氣體(約30%)經排風過濾器過濾后排出柜體。

　　柜體氣密，全排放式，所有氣體不參與循環，工作人員通過連接在柜體的手套進行操作，俗稱手套箱(Golve box)，試驗品通過雙門的傳遞箱進出安全柜以確保不受污染，適用于高風險的生物試驗。如果不允許循環化學氣體，則必須使用裝備硬管的B2型二級生物安全柜。由于B型安全柜不是獨立平衡系統，它的內置風機只能制造下沉氣流，安全柜依賴外排風機制造進氣流。這種型號的安全柜在安裝和維護時會較為復雜，因為外排風機必須與內置風機保持平衡，否則將導致對操作人員或產品的安全性能的失效。

　　在允許循環化學氣體的操作條件下，可以使用外接排放管道蓋(Exhaust Collar)的A2型二級生物安全柜。排放管道蓋與一般硬管不同的是有可吸入空氣的進氣孔；排放管道蓋與外排管道連接，然后接到一個外排風機。排放管道蓋上的進氣孔對于A2型二級生物安全柜通過內置風機保持進氣流和下沉氣流的平衡至關重要。如果使用密封的外接風管，進氣流將會過強可能導致安全柜對產品的保護實效；而排放管道蓋上的進氣孔可以從室內吸入空氣，而不會影響安全柜內的氣流平衡。此條件只適用于微量有毒化學物質。

　　二級A2型生物安全柜被廣泛應用于衛生、食品安全、生物制藥等領域，其主要作用是保護操作原代培養物、菌毒株及診斷性標本等具有感染性實驗材料的實驗者，避免在操作過程中可能產生的感染性氣溶膠或濺出物帶來的危害，同時，還可起到保護實驗室環境及實驗樣本的作用。是實驗室不可少的安全防護設備。在分類目錄中被界定為三類。