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高效液相色譜儀使用前要做好準(zhǔn)備工作

閱讀:733        發(fā)布時(shí)間:2023-3-23
  高效液相色譜儀(High Performance Liquid Chromatography,簡(jiǎn)稱HPLC)是一種廣泛應(yīng)用于化學(xué)、制藥、食品等領(lǐng)域的分離和分析技術(shù)。它的主要作用是利用不同成分在移動(dòng)相和固定相中的相互作用,實(shí)現(xiàn)混合物中組分的快速分離和檢測(cè)。
  HPLC的分離原理基于物質(zhì)在移動(dòng)相和固定相中的不同溶解度、吸附性、離子交換能力、分子尺寸等因素,實(shí)現(xiàn)物質(zhì)的分離。該技術(shù)主要包括以下幾個(gè)步驟:
  1.移動(dòng)相的選擇:根據(jù)樣品特性選擇合適的溶劑作為移動(dòng)相,使得樣品溶解度合適且在柱子中的流動(dòng)性較好。
  2.樣品進(jìn)樣:將待分析樣品注入進(jìn)樣器中,通過(guò)自動(dòng)化進(jìn)樣系統(tǒng)在固定時(shí)間和量下將樣品推向柱子。
  3.分離過(guò)程:樣品在柱子中與固定相發(fā)生相互作用,根據(jù)物質(zhì)在固定相中的特性,在柱子中發(fā)生分離。
  4.檢測(cè)分析:檢測(cè)分離出來(lái)的各個(gè)組分,得到分離結(jié)果。
  5.數(shù)據(jù)處理:對(duì)分離出的各個(gè)組分進(jìn)行定量和質(zhì)量分析,提供分析結(jié)果。
  HPLC的操作方法需要先對(duì)儀器進(jìn)行正確的配置和樣品的預(yù)處理操作,主要步驟為:
  1.儀器準(zhǔn)備:檢查儀器是否正確接通電源、冷卻系統(tǒng)是否正常、移動(dòng)相是否足夠并調(diào)整流量、儀器是否清潔無(wú)污染等。
  2.柱子配置:選擇合適的柱子和固定相,并將柱子裝入儀器。
  3.樣品預(yù)處理:根據(jù)不同的樣品特性,包括化學(xué)性質(zhì)、物理性質(zhì)和濃度等,進(jìn)行不同的預(yù)處理方法。例如,對(duì)于有機(jī)物質(zhì)的樣品,通常需要對(duì)樣品進(jìn)行提取、濃縮、過(guò)濾等處理,減少干擾。
  4.進(jìn)樣處理:將預(yù)處理好的樣品通過(guò)進(jìn)樣器注入到HPLC系統(tǒng)中去。
  5.運(yùn)行條件:根據(jù)樣品特性,選擇適當(dāng)?shù)囊苿?dòng)相流量、時(shí)間和溫度等參數(shù),使得樣品在柱子中能夠良好地分離。
  6.結(jié)果判斷:根據(jù)不同的檢測(cè)方式(如吸光度檢測(cè)、熒光檢測(cè)、電化學(xué)檢測(cè)等),獲得分離結(jié)果,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量或質(zhì)量分析。

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