cube-biotech PureCube 疏水相互作用瓊脂糖說(shuō)明書(shū)
疏水相互作用
疏水相互作用色譜法是一種成熟的方法，可根據(jù)蛋白質(zhì)的表面電荷和疏水性純化蛋白質(zhì)。提供疏水表面的色譜基質(zhì)用于分離。這種方法不需要將任何親和標(biāo)簽融合到要純化的蛋白質(zhì)上。因此它適用于天然和重組蛋白的純化。我們提供疏水相互作用基質(zhì)，其表面具有苯基、辛基或丁基。對(duì)于一種新型蛋白質(zhì)，強(qiáng)烈建議比較不同的基質(zhì)，并且可以使用含有少量每種基質(zhì)的 HIC 篩選集。我們的 PureCube 瓊脂糖基于 BioWorks Workbeads，提供高的結(jié)合能力和可重復(fù)的結(jié)果，尤其是在 FPLC 色譜應(yīng)用中。
PureCube 疏水相互作用瓊脂糖提供：
我們還在一個(gè)實(shí)用的入門(mén)套件中提供所有三種 HIC 瓊脂糖樹(shù)脂，用于測(cè)試目的。
疏水相互作用 (HIC) 如何用于蛋白質(zhì)純化？
HIC 分離基于蛋白質(zhì)的疏水區(qū)域與表面上含有疏水基團(tuán)（例如丁基、辛基或苯基）的色譜介質(zhì)的相互作用。高離子強(qiáng)度增強(qiáng)了這種相互作用，使 HIC 成為硫酸銨沉淀后或在高鹽緩沖液中從離子交換介質(zhì)洗脫后的理想純化步驟。
捆綁
蛋白質(zhì)可能在非常高的鹽濃度下沉淀，因此建議在小規(guī)模實(shí)驗(yàn)中測(cè)試感興趣的蛋白質(zhì)是否以結(jié)合所需的鹽濃度保持在溶液中。
洗脫
結(jié)合的蛋白質(zhì)可以用低鹽緩沖液洗脫。強(qiáng)烈建議使用鹽梯度（例如硫酸銨或氯化鈉）進(jìn)行洗脫，以確保蛋白質(zhì)保持在穩(wěn)定所需的*佳鹽濃度。
我的蛋白質(zhì)用哪種基質(zhì)？
與等電點(diǎn)測(cè)定相比，很難預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的整體疏水性，因?yàn)橹挥械鞍踪|(zhì)表面上的孤立斑塊可能是疏水性的，但足以與 HIC 基質(zhì)相互作用。因此，建議測(cè)試不同的樹(shù)脂是否適合以使蛋白質(zhì)保持在溶液中的濃度結(jié)合感興趣的蛋白質(zhì)，以適合蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和活性的鹽濃度將其洗脫，同時(shí)將其與污染蛋白質(zhì)分離。PureCube HIC 入門(mén)套件是為輕松比較三種不同材料而開(kāi)發(fā)的。
圖 1：疏水相互作用基質(zhì)中使用的官能團(tuán)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
圖 2：在 PureCube Phenyl Agarose 和競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品上純化兩種測(cè)試蛋白。對(duì)于較大的測(cè)試蛋白質(zhì)（BSA，66 kDa），兩種 HIC 樹(shù)脂均獲得了約 25 mg/mL 的樹(shù)脂產(chǎn)量。對(duì)于較小的測(cè)試蛋白（14 kDa），PureCube 基質(zhì)的產(chǎn)量大約高出 4 倍（PureCube：45 mg/mL，競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手 G：11 mg/mL）。純化分批進(jìn)行，在 1.5 M 硫酸銨、100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下結(jié)合和洗滌，并在 100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下洗脫。E1、E2：洗脫級(jí)分 1 和 2。
特征
此列表包括適用于所有 HIC 瓊脂糖產(chǎn)品的功能。如果在特定功能中存在差異，則會(huì)提及。
| 用法 | 通過(guò)疏水相互作用與蛋白質(zhì)結(jié)合 |
| 特異性 | 蛋白質(zhì)中的疏水殘基 |
| 流量 | 高達(dá) 6 毫升/分鐘 |
| 灌裝量 | 作為 50% 的懸浮液交付 |
| pH 穩(wěn)定性 | 酸堿度 2-13 |
| 化學(xué)基團(tuán)密度 | 40 微摩爾/毫升 |
| 結(jié)合能力 | BSA 25 mg/mL（辛基為 10mg/mL）；溶菌 45 mg/mL（辛基為 20 mg/mL）。 |
| 珠粒大小 | 40微米 |
| 珠配體 | 苯基、辛基或丁基 |
| 所需設(shè)備 | -
裂解緩沖液 -
洗滌緩沖液 -
洗脫緩沖液 -
用于 50 mL 管 (min10,000 xg) 和 2 mL 管的冷凍離心機(jī) -
冷凍超高速或超速離心機(jī)，容量可達(dá) 100.000 xg -
端對(duì)端旋轉(zhuǎn)器 -
2 mL 微量離心管 -
15 mL 聚丙烯管、50 mL 聚丙烯管和 50 mL 聚碳酸酯高速離心管（用于超速離心機(jī)） -
微量移液器和微量移液吸頭 -
帶蓋底部出口的一次性重力流柱，2 mL -
?酸堿度計(jì) -
端對(duì)端搖床 -
SDS-PAGE 緩沖液、試劑和設(shè)備 可選：Western Blot 試劑和設(shè)備 |
