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上海起發實驗試劑有限公司

上海起發現貨PROGEN PRAAV9說明書

時間:2019-10-28閱讀:1534
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上海起發為PROGEN的中國代理商,PROGEN公司成立于1983年,總部位于德國海德堡,由海德堡大學教授聯合創辦,是德國一家生物公司,也是德國癌癥研究中心的合作伙伴。

PROGEN 主要產品線:

體外診斷領域中細胞生物學和生物醫院學實驗所需要的科研試劑盒抗體。

核心產品主要為:K19抗體的衍生類產品和細胞膠蛋白類抗體等。

 

品牌:PROGEN

貨號:PRAAV9

上海起發現貨PROGEN PRAAV9說明書

AAV9 Titration ELISA

*的微量滴定板酶免疫測定法,用于定量檢測完整的AAV9 wt病毒體,AAV9重組病毒體或人腺相關病毒9的已裝配和未裝配的空衣殼。捕獲抗體檢測到未裝配的衣殼蛋白上不存在的構象表位。 

貨號: PRAAV9 
數量:  96次

詳細1*的微量滴定板酶免疫測定法,用于定量人腺相關病毒9的病毒體和/或組裝的空衣殼。捕獲抗體可檢測未組裝的衣殼蛋白上不存在的構象表位。
詳細2試劑盒對照/標準品:凍干的AAV9空衣殼
提供表格試劑盒,12 x 8孔試紙
有可能的使用僅供研究使用

 

腺相關病毒(AAV)是非致病性的ssDNA病毒,作為基因治療的病毒載體,正在被廣泛研究。該病毒轉導多種分裂和非分裂細胞,顯示長期基因表達,細胞免疫應答低。AAV已用于多項臨床試驗(例如FIX,CFTR,帕金森氏病,Canavan病)中,顯示沒有嚴重的與載體相關的不良反應。AAV9對于CNS中的應用特別有用。 

目前用于表征AAV制劑的方法包括滴定ELISA,實時PCR,DNA點印跡,轉導單位測定,感染中心測定,SDS-PAGE或電子顯微鏡。

AAV制劑所含的空衣殼比填充的,具有治療活性的病毒顆粒多10倍。由于完整顆粒和空顆粒均可誘導免疫反應,因此對于體內應用而言,確定完整的顆粒滴度至關重要。

通過PROGEN的AAV9滴定ELISA進行免疫定量分析提供了一種快速,靈敏且可重現的方法,用于滴定完整的AAV9 wt病毒體,AAV9重組病毒體或已組裝且完整的空AAV9衣殼。

ELISA原理:

該測定基于夾心ELISA技術,其中將對組裝的AAV衣殼上的構象表位具有特異性的單克隆抗體(mab)涂在板上,并用于從樣品中捕獲AAV顆粒。

捕獲的AAV顆粒的檢測過程分為兩個步驟。

  1. 生物素偶聯的單克隆抗體與捕獲的AAV顆粒結合。
  2. 鏈霉親和素過氧化物酶偶聯物與生物素分子反應。底物的添加導致顯色反應,其與特異性結合的病毒顆粒的量成比例。

AAV定量方法的比較:

每種常用的量化方法各有利弊:

  • qPCR已被廣泛使用,但存在一些問題,例如樣品制備,引物設計或PCR效率,這些問題可能導致實驗室間結果之間的高度差異。
  • 數字液滴PCR方法克服了qPCR的某些局限性。但是,由于不同的樣品處理方案,實驗室之間仍然可能發生變化。
  • 如果使用可靠的參考材料,則斑點印跡是一種簡單且定量的方法。然而,它通常受蛋白質印跡的線性和動態范圍的限制。

考慮到上述技術的實際缺陷,目前常規的夾心ELISA在實驗室間和實驗室間的變異以及易于使用方面似乎是*的。因此,它代表了可靠和可再現的總rAVV衣殼滴度定量的宜格式。

改組/變異的AAV的使用:

改組/突變的AAV載體的識別取決于受改組/突變影響的特定衣殼區域。用于PROGEN的AAV ELISA的捕獲抗體結合特異性的(在某些情況下還定義為良好的構象表位)。這些表位是由相應的AAV血清型的衣殼組件產生的。ELISA可能識別您的改組/突變的AAV載體的跡象是抗體結合表位的存在。然而,衣殼蛋白的蛋白質序列的變化也可能影響蛋白質的構象,因此,AAV衣殼上呈現的表位的構象。這可能會影響抗體的結合親和力,并影響基于AAV ELISA試劑盒提供的(非改組)試劑盒對照的效價測定。由于這些屬性在很大程度上取決于所執行的特定改組/突變,因此PROGEN無法保證對改組/突變的AAV向量進行成功且的定量。即使改組/突變的AAV衣殼上仍存在抗體結合表位,也需要針對您的特定AAV載體測試和優化您的檢測方法。

PROGEN強烈建議您生產和校準合適的(改組/突變)試劑盒對照品,以確保使用PROGEN ELISA試劑盒可靠地確定滴定的AAV載體的滴度。

有限使用標簽許可:僅研究使用
產品已授權給PROGEN Biotechnik GmbH。這些產品用于開發,制造和銷售基于購買的產品和/或包括購買的產品的次級產品/衍生物
需要使用基于許可的分許可協議。

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