您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)！ 登錄| 免費注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
18017111930
當(dāng)前位置：迪圖（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>確認(rèn)RNA的質(zhì)量常用的三種方法
實時熒光定量PCR技術(shù)是通過測定RNA的轉(zhuǎn)錄水平來評估基因的活力。RNA樣本提取的質(zhì)量直接影響基因表達(dá)分析。影響RNA品質(zhì)的因素有以下三種：RNA濃度、RNA純度和RNA完整性。
檢測RNA濃度、純度和完整性的方式主要有以下幾種：
紫外分光光度計法：
測量260nm吸收值計算RNA濃度，測量260nm/280nm吸收值的比值，用于評估RNA純度。需要注意的是：在檢測核酸物質(zhì)時應(yīng)該在固定的PH溶液中進(jìn)行。
260nm/280nm的比值范圍在 1.9~2.1 之間。＜1.9，說明有蛋白質(zhì)殘留；＞2.1，說明RNA可能發(fā)生降解。
瓊脂糖凝膠電泳：
完整的RNA通常有三條帶，最亮的是28S條帶，其次是18S條帶，最淡的是5S條帶（部分試劑盒提取時會過濾掉5S條帶）。通過瓊脂糖凝膠電泳可以檢測28S和18S的比值。該方法主要用于檢測RNA的純度和完整性。
如果28S和18S條帶明亮、清晰、條帶銳利，28S的亮度在18S條帶的兩倍以上，我們認(rèn)為RNA的質(zhì)量。
若RNA條帶出現(xiàn)彌散，原因可能：RNA被核酸酶降解、電壓或電流過大、上樣量過高或過低等。
上述兩種方法在實驗室比較常用，此外還有幾種檢測方式供大家選擇。
熒光染料檢測：
通過熒光染料和RNA結(jié)合，熒光活性增強(qiáng)。此方法的靈敏度較高，主要用于檢測RNA的濃度。
微毛細(xì)管電泳：
可使用軟件的RIN（RNA Integrity Number）分?jǐn)?shù)評估，10為RNA完整性最好，0為最差。此方法的靈敏度和分辨率較高，可用于檢測RNA濃度、純度和完整性。
3’-5’完整性檢測：
是在一個RNA樣本中檢測GAPDH mRNA的完整性來代表所有RNA的完整性，主要用于檢測RNA的完整性。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
