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細胞實驗驗證基因功能

時間:2023/6/21閱讀:1001
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一、實驗材料: 疾病對應的細胞系(或者是原代細胞),預算充足情況下可以選擇2種細胞系,暫定為:A和B細胞
二、實驗方案:敲低兩種細胞的目的基因1、過表達兩種細胞的目的基因1(若是miRNA可以使用mimics、inhibitor)
三、干擾片段篩選2種細胞都需要篩選(當用mimics和inhibitor時也需要初步篩選表達效果)
目的基因1干擾片段篩選:針對目的基因1設計并合成3條siRNA及NC,轉染細胞,QPCR篩選出干擾 的片段進行后續實驗; 
四、實驗分組:A或B細胞

  • A

  • A+siRNA NC對照組

  • A+siRNA目的基因1干擾

  • A+過表達目標基因1 

  • A+過表達空載

  • 抑制劑處理濃度1

五、檢測項目:

  • 細胞增殖或者細胞毒性檢測(CCK法/MMT),

  • 流式檢測細胞周期,

  • 流式檢測細胞凋亡,

  • 細胞侵襲實驗(transwell),遷移、劃痕

  • WB檢測細胞信號通路中蛋白的表達變化,

  • QPCR檢測信號通路中基因的表達, 

  • 免疫熒光檢測下游信號通路蛋白

  • 流式多色檢測某些marker指標

  • Coip檢測A和B蛋白是否結合

  • 雙熒光素酶檢測A和B是否結合

  • 油紅O染色

  • 生化檢測:SOD,CAT等

  • 透射電鏡

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