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免疫酶標技術

時間:2023/6/2閱讀:600
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1) 直接法
1.標本固定。
2.PBS洗滌2×3分鐘。
3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制內源性過氧化物,室溫10~20分鐘。
4.正常血清(1:10)孵育,室溫20分鐘。
5.滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。
6.PBS洗滌3×3分鐘。
7.DAB+H2O2顯色5~10分鐘,鏡下控制染色結果。DAB+H2O2應用前15分鐘配制。
8.充分水洗后,復染、脫水、透明、封片、鏡檢。

2) 間接法
1.標本固定。
2.PBS洗滌2×3分鐘。
3.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)抑制內源性過氧化物,室溫10~20分鐘。
4.正常血清(1:10)孵育,室溫20分鐘。
5.滴加第一抗體,37℃1小時或4℃過夜。
6.PBS洗滌3×3分鐘。
7.滴加酶標二抗,室溫1小時。
8.PBS洗滌3×3分鐘。
9.0.04%DAB+0.03 %H2O2顯色5~10分鐘。
10. 充分水洗后,復染、脫水、透明、封片、鏡檢。

3) PAP法(過氧化物酶抗過氧化物酶抗體復合物法)
1.標定固定后,PBS洗滌。
2.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)阻斷內源性過氧化物,室溫10~20分鐘。
3.PBS洗滌2×3分鐘。
4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室溫20分鐘。
5.滴加一抗,室溫1小時或4℃過夜。
6.PBS洗滌3×3分鐘。
7.滴加二抗,室溫30分鐘。
8.PBS洗滌3×3分鐘。
9.加PAP復合物,室溫60分鐘。
10. PBS洗滌3×3分鐘。
11. 0.04%DAB+0.03% H2O2顯色5~10分鐘。
12. 充分水洗。
13. 蘇木精復染,封片觀察。

4) 雙PAP法
1~10同單PAP法。
11. 二次加酶標二抗。
12. PBS洗。
13. 二次加PAP。
14. PBS洗。
15. 0.04%DAB+0.03 %H2O2顯色5~10分鐘。
16. 蘇木精復染核,封片,鏡檢。

5) ABC法(卵白素-生物素-過氧化物酶復合物法)
1~8同PAP法
9)加ABC液,室溫60分鐘。
10) PBS洗。
11) 0.04%DAB+0.03% H2O2顯色5~10分鐘。
12) 充分水洗。
13) 蘇木精復染核,封片,鏡檢。

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