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美國corning(康寧)細胞計數儀常見問題

時間:2023/5/27閱讀:719
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康寧細胞計數儀(貨號為6749)可計數的細胞大小和濃度范圍是多少?
可計數的細胞大小范圍為4~70 μm,細胞濃度范圍為5 x 104~1.0 x 107細胞/mL。

康寧細胞計數儀能否對活細胞和死細胞進行區分?
可以。通過細胞懸液與臺盼藍1:1混合,臺盼藍會將死細胞染成深藍色,而活細胞則不被臺盼藍染色。將混合液加入計數板中計數時,在軟件頁面選擇“trypanblue, yes (1:1)", 計數儀會自動分析死活細胞的數量及比例,并將結果直接展示在結果區,該結果無需再乘以2。

康寧細胞計數儀能否對細胞團簇進行區分并準確計數?
可以分析含有細胞簇的樣品。以下是對于293T細胞計數的測試圖片供您參考,兩圖中紅圈圈出部分是細胞團簇,右圖中綠點代表檢測到的活細胞,紅點代表識別的死細胞。


計數時,視野中心細胞清晰,而邊緣細胞對焦不清晰,尤其是小于10um的細胞,是否會影響計數結果?
由于計數儀鏡頭是球形的,在對焦準確時,即使邊緣的對焦不是很清晰,儀器仍然會對視野中計數范圍內(4-70 μm)的細胞進行計數。若您對計數結果的準確性有較高的要求,建議您拍攝多張圖片進行計數,軟件可以將多張圖片中的結果整合取平均數,以提高計數準確性。

如何更好地對焦, 從而確保計數準確?
為了準確地計數分析,需要確保對焦準確。通過聚焦旋鈕多次順時針或逆時針旋轉,并且可以進一步放大圖像觀察,能夠看到活細胞有明亮的中心和清晰的邊緣,如下圖所示,左側圖為未成功對焦,而右側圖中對焦準確:


 

康寧細胞計數儀能否對外周血單核細胞(PBMC)進行計數?
可以。PBMC細胞大小約7-8 μm,符合康寧細胞計數儀的計數范圍。在對PBMC計數時,需要注意避免碎片等非細胞雜質被識別成死細胞從而影響結果,因此準確對焦非常重要。死細胞在對準焦后呈現出實心黑點的樣子,如下圖所示,盡可能避免對焦后有光環或模糊狀的存在。

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