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凝膠電泳操作注意事項
閱讀：4799 發(fā)布時間：2021-1-29
1．選用優(yōu)質(zhì)的瓊脂糖：不同品牌的瓊脂糖在質(zhì)量上有較大的差異。劣質(zhì)瓊脂糖會導(dǎo)致DNA條帶模糊，甚至條帶缺失。因此請盡量選擇質(zhì)量穩(wěn)定可靠的品牌。
2．選擇適當(dāng)?shù)哪z濃度：
瓊脂糖凝膠的線性DNA分辨范圍
3．凝膠制備：配制凝膠和電泳應(yīng)選用相同的1x緩沖液；使用的容器體積至少是凝膠溶液的3倍，以免溶液沸騰時溢出；制膠過程中盡量趕除氣泡；根據(jù)樣品的濃度和體積選擇適當(dāng)大小的梳子。
4．選擇適當(dāng)?shù)碾娪揪彌_液：GenStar® SD緩沖液（Cat. No. E101-50）和TBE緩沖液適用于分離比較小的DNA段，TAE緩沖液（Cat. No. E102-50）適用于分離比較大的DNA段；緩沖液應(yīng)及時更新；膠回收純化應(yīng)使用新鮮配制的1x電泳緩沖液，以防核酸酶和DNA雜帶污染。
5．核酸樣品的準(zhǔn)備：提取的DNA樣品應(yīng)去除蛋白和多余的鹽分等雜質(zhì)；PCR樣品應(yīng)盡量在24小時內(nèi)電泳檢測，否則條帶容易模糊。
6．上樣緩沖液：所有泳道應(yīng)使用相同的上樣緩沖液，以防止因離子強度不同造成條帶遷移率偏差。
7．適量上樣：上樣過多會導(dǎo)致上樣孔超載，出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象；上樣體積過小可能導(dǎo)致條帶亮度不均。
8．電壓及電泳時間：根據(jù)電泳槽型號、凝膠濃度、電泳緩沖液種類和目的條帶大小等選擇適當(dāng)?shù)碾妷汉碗娪緯r間。使用GenStar®SD電泳緩沖液時，電壓設(shè)置為20~35 v/cm膠長；使用TAE或TBE緩沖液時，電壓以不超過20 v/cm膠長為宜。