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ELISA的多項(xiàng)環(huán)節(jié)注意（內(nèi)附示意圖）
閱讀：1594 發(fā)布時(shí)間：2014-8-21 
今日上午上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司的一位多年老客戶吳老師來電給我公司訂購白介素6試劑盒，在咨詢的過程中吳老師說：“還記得我*次實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，那時(shí)候什么都不懂，也不知道找你們的。再想想現(xiàn)在，實(shí)驗(yàn)做的多了自然就熟練了，也不會(huì)那么容易出錯(cuò)了。其實(shí)現(xiàn)在想想，只要在ELISA的每個(gè)環(huán)節(jié)都能細(xì)心做好，稍加注意就能做出很不多的實(shí)驗(yàn)了”
· 選擇試劑
選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
· 加樣
| 出錯(cuò)的可能原因 |
| 血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。 |
| 手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)。 |
| 加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。 |
| 解決辦法 |
| 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 |
| 加樣后及時(shí)放入孵箱。 |
| 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 |
| 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 |
| 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。 |
· 孵育
| 可能原因 | 解決辦法 |
| 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*。 | 貼封片或加蓋。 |
| 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。 | 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。 |
· 洗板
| 可能原因 |
| 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。 |
| 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 |
| 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 |
| 解決辦法 |
| 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干。 |
| 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。 |
· 顯色
· 終止
可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
· 讀板
如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
其實(shí)我們?cè)趯?shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。