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elisa標本采集,ELISA試劑盒操作流程
閱讀：1941 發布時間：2012-9-3elisa試劑盒標本采集和保存
◎可用作 ELISA的標本十分廣泛，體液（如血清，血漿，各種積液），分泌物（如唾液）和排瀉物（如糞便，尿液）均可作為標本以測定其中 的抗原或抗體成分，一般使用血清。
n 標本采集時應盡量避免溶血，因紅細胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質干擾立可讀方法的結果，可造成假陽性；長菌的標本同樣的道理易 產生假陽性。
◎抗凝不*的標本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝劑。
◎標本在冰箱中保存時間過長易導致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深，一般血清置4℃冰箱5天內完成測試。如需保存一周以 上則要-20℃冰凍保存，融解時應上下顛倒充分混勻，同時避免氣泡。
◎ELISA的靈敏度>1ng/ml水平上,標本間的污染要盡量避免，尤其不應與生化試驗用同一管標本.zui起碼應先做免疫 后做生化.
附：內外干擾物質的影響分析
溶血 脂濁 RF 自身抗體 AFP 補體 & nbsp; 肝素 ; EDTA
A 0.165 0.200& nbsp; 0.250 &n bsp; 0.264 &nb sp; 0.186 0.146 0.183 0.126
S 0.023 0.016& nbsp; 0.007 &n bsp; 0.029 &nb sp; 0. 010 0. 007 0.019 &nbs p; 0.013
A對照0.151 0.195 ;0.195 0.195 & nbsp; 0 .116 0.116 0.116 0.116
S 0.038 0.008& nbsp; 0. 008 0.008 &nbs p; 0.018 0.018 &n bsp; 0.018 0.018
P > 0.05 > 0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 <0.01 <0.01
ELISA試劑盒操作流程：
1. 根據需要，將若干孔德條帶放置在支架上；
2. 將標本、陰性質控、陽性質控以及標準品作 1：200 稀釋（將５μｌ樣品加稀 釋液稀釋到 1ml，混勻） ；
3. 取 100μl 已稀釋的血清樣品、標準品和陰性質控、陽性質控加入相應得孔板 內（質控和標準品至少需做兩孔） ，A1 孔不加液體作為空白底色；
4. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘；
5. 到時間后將孔被液體甩去，并用 1X 洗滌液反復清洗 4 次，zui后用蒸餾水洗 一次；
6. 在每孔內加 100μl 酶結合物（需按比例稀釋，除 A1 孔外） ，輕微混勻；
7. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘；
8. 甩去孔內酶結合物，用 1X 洗滌液反復清洗 4 次，zui后用蒸餾水洗一次； （包括 A1 孔也加） ，輕微
9. 在每孔內加 100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液） 混勻；
10. 37℃放置 15 分鐘； ，輕微混勻；
11. 每孔加 50μl 1N 硫酸終止液（包括 A1 孔）
12. 在 15 分鐘內，用酶標儀在 450nm 處讀取吸光度值（OD 值） （將酶標儀 A1 孔設定為空白孔） 。
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