化工儀器網
技術文章
ELISA kit操作中的實驗禁忌
閱讀：1078 發布時間：2019-10-18酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 因其操作簡單，靈敏度高，特異性好，經濟安全等特點而在臨床上廣泛應用，但是由于其操作步驟復雜，一般包括試劑準備，樣本收集，加樣，溫育，洗滌，顯色，比色，結果判定等，其中任何一項操作不當都會對檢測結果產生很大影響。因此，必須加強ELISA檢測的全面質量控制，保證其結果的準確可靠。Elisa實驗結果的影響因素包括檢測樣品因素、操作因素等。在實驗操作的過程中有一些技術要點，在這里，上海恒遠生物為大家分享操作Elisa kit的實驗禁忌---(僅供參考)：
1.加樣后及時放人孵箱，標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。
2.實驗時必須戴手套，穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度。
3.剩余樣品及廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
4.同批號試劑組分不得混用。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
7.要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質，溫度環境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應該將其zui高量程和低量程進行確定。
8.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。
9.吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，吸取的量不夠準確。
10.手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
11.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃流酸具有腐蝕性，應盡量避免接觸皮膚。
ELISA檢測操作步驟復雜，可能會影響測定結果的因素較多，分布在測定操作的各個步驟中，因此必須加強各環節的質量控制，才能得到準確可靠的檢測結果。