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恒遠楊經理特別分享，用酶聯免疫法檢測瘤壞死因子的過程步驟
閱讀：1716 發布時間：2014-4-1 我們今天來給朋友們介紹一個檢測實驗，我公司所代理的酶聯免疫試劑盒因質量的、價格的合理再加上銷售部的完善支持使得朋友們的信任，同時上海恒遠在這里也表示非常的感謝。今天上午我公司楊發來一則實驗說要特別分享給大家，下面我們就來看看用酶聯免疫法檢測瘤壞死因子的過程步驟。
原理：
在微孔反應板上包被抗人TNF-α單克隆抗體，待測標本和標準品中的TNF-a會與單克隆抗體結合，游離的成分被洗去，同時加入生物素化的抗人TNF-α抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。生物素與親和素特異結合，抗人TNF抗體與結合在單克隆抗體上的人TNF-α結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色劑，若反應孔中有TNF-α，HRP會使無色的顯色劑呈現藍色，加終止液變黃色。在波長450nm處測吸光度，TNF濃度與吸光度成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中的TNF-α濃度。
試劑、材料所需：
1、預包被微孔反應板
2、濃縮酶結合物
3、酶結合物稀釋液
4、標準品和標本稀釋液
5、濃縮生物素化抗體
6、IFN標準晶
7、濃縮洗滌液
8、顯色劑A、B
9、終止液
10、酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀
步驟
1、在微孔反應板相應孔中分別加入待測樣本、不同濃度標準品100txl，再加生物素化抗體工作液50tzl。
2、振蕩混勻，置20-25℃環境中溫育120min。
3、將孔內液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。
4、除空白孔外，加入酶結合物工作液100u1。
5、振蕩混勻，置20-25℃環境中溫育30min。
6、將孔內液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。
7、每孔加入顯色劑A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37C環境中避光顯色10min。
8、加入終止液50ul后，輕輕振蕩混勻。用酶標儀(450nm波長)測定各孔吸光度，與標準曲線對照，求出TNF值。
以上就是今天的實驗內容了，我公司的五折*還剩下十天，需要的朋友們快來訂購酶聯免疫試劑盒哦！zui后我們來看下實驗中您需要注意的六條事項：
1、試劑盒從冷藏環境中取出時應在室溫環境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔條用自封袋密封保存。
2、酶標板洗滌時各孔均需加滿洗滌液，防止孔內有游離酶不能洗凈。應設定30～60s的洗滌浸泡時間。
3、滴加試劑前應將滴瓶翻轉數次，使液體混勻。滴加時瓶身應保持垂直，以使滴量準確。
4、所有樣品和廢棄物都應按傳染源處理。終止液為2mol／L硫酸，使用時應注意安全。
5、每批樣本應同時做標準曲線。
6、若標本OD值在標準曲線測定范圍以外，應適當稀釋后重測。