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如何運用單克隆-多克隆抗體進行細胞染色
閱讀：1847 發布時間：2013-8-5如何運用單克隆-多克隆抗體進行細胞染色
在細胞染色實驗中，常用單克隆或多克隆抗體。一般而言，多抗能夠提供較強的信號，而單抗的背景清晰。只要注意其特點，2種抗體都可以有效地利用。
（一）用多克隆抗體進行細胞染色
良好的多抗血清包含多種針對抗原不同表位的抗體，雖然空間競爭阻止大量抗體與抗原分子結合，但數個抗體分子的結合往往得到較強的信號。能夠產生信號強信號是用多抗進行細胞染色的主要優點。
多抗血清中除了含有特異性抗體外，還含有較高濃度的無關抗體，這些抗體包括動物血清中所有的抗體成分。這些抗體是細胞染色的zui大。用多克隆抗體可以帶來令人滿意的結果，但必須仔細設立對照。這包括仔細滴定一抗，盡量減低無關抗體產生的信號，仔細比較對照血清的染色結果。
即使血清來自未經免疫的動物，在高濃度情況下，也能引起較強的背景色。部分原因是由于抗體的非特異性附著在經固定后的細胞上，部分是由于血清中抗體特異性結合所致。由于這些抗體在血清中并非主要活性成分，因此可以通過稀釋抗體使其信號降低至不被檢測出的程度。第二種降低這些背景信號的方法是用丙酮干燥粉預先吸收多抗血清。第三種方法是去除血清中的非特異性抗體，利用免疫親和純化的方法可以得到適用于細胞染色的良好的抗體來源。在某些情況下，利用免疫親和法純化抗體是得到清晰染色結果的基本步驟之一。
由于多抗血清包含的抗體通常是針對抗原的多種表位，包括不易變性的表位，因此這些抗血清在用于經過*固定的標本染色時效果較好，尤其是用于經甲醛固定標本的染色。
（二）用單克隆抗體進行細胞染色
用單克隆抗體進行細胞染色往往得到良好結果，因為單抗純度高、特異性強，在較寬的濃度范圍內染色的背景色清晰。對經有機溶劑或甲醛固定的細胞，大部分單抗可以得到較好的染色結果，盡管如此，部分單抗的染色結果不理想。這可能由下列兩個原因造成：抗原表位被覆蓋在細胞結構之內；或者在固定過程中被破壞。
用單克隆抗體進行細胞染色時偶爾也出現交叉反應。這種交叉反應是特異性的，可能是因為在不同的細胞組分中存在共同表位。單抗與細胞內高濃度多聚體蛋白，如細胞骨架蛋白所致的交叉反應是常見的。這種交叉反應一般較弱，但如果抗原濃度較高且雙價連接，將使交叉反應信號增強。應盡可能應用一系列針對同一抗原不同表位的單克隆抗體來確定抗原的位置。
（三）用混合的單克隆抗體進行細胞染色
應用混合單抗進行細胞染色能夠增強染色信號，只要混合的單抗沒有競爭作用，增強信號強度意味著實驗成功。但應注意，在混合抗體前，每一種單抗應分別經過測試。
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